Aislamiento de Malassezia furfur en un gato

El género Malasseziaconsiste en levaduras lipofílicas que se sabe que son componentes de la microflora de la piel humana y de muchos mamíferos y aves y que rara vez se aíslan del medio ambiente (11). Estas levaduras tienen la típica propiedad fisiológica de utilizar los lípidos como fuente de carbono. A excepción de Malassezia pachydermatis, el resto de especies del género Malassezia requieren la suplementación con ácidos grasos de cadena larga (C12 a C24) para su crecimiento in vitro. La taxonomía de estas levaduras siempre ha sido objeto de controversia (8). Hace unos años, las especies aceptadas eran M. furfur (Robin) Baillon 1889 y M. paquidermatis (Weidman) Dodge 1935. Recientemente, se ha revisado el género basándose en datos moleculares y requisitos de lípidos y se ha ampliado para incluir siete especies: M. furfur, M. pachydermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta y M. slooffiae (4).

M. furfur es un conocido patógeno cutáneo oportunista de los humanos. Es el agente causante de la pitiriasis versicolor, la pitiriasis capitis, la dermatitis seborreica y la foliculitis. No obstante, la importancia de las especies de Malassezia está aumentando como patógeno emergente, ya que se ha descrito que causan infecciones sistémicas en pacientes inmunodeprimidos y en neonatos que reciben lípidos intravenosos (1, 12). El propósito de esta investigación fue estudiar la microbiota lipofílica de los canales del oído externo de los gatos sin otitis externa. En este trabajo se describe el primer aislamiento de M. furfur en un gato.

Se tomaron muestras de los conductos auditivos externos de 33 gatos domésticos (17 machos y 16 hembras) sin otitis externa utilizando un hisopo. Las muestras se cultivaron en agar glucosa Sabouraud (SGA; Biolife s.r.l., Milán, Italia), SGA suplementado con aceite de oliva (10 ml/litro), y medio de Leeming (10 g de peptona, 5 g de glucosa, 0,1 g de extracto de levadura, 4 g de bilis de buey desecada, 1 ml de glicerol, 0,5 g de monoestearato de glicerol, 0,5 ml de Tween 60, 10 ml de leche de vaca entera, 12 g de agar por litro, pH 6,2) (9). Todos los medios contenían 0,05% de cloranfenicol y 0,05% de cicloheximida. Cada frotis de cerumen se fijó con calor, se tiñó con Diff-Quick y se examinó al microscopio para detectar la presencia de células típicas de Malassezia. Las placas se incubaron a 35°C y se examinaron después de 3, 5, 7 y 14 días. Cuando se detectó crecimiento, se seleccionaron cinco colonias diferentes de la SGA suplementada con aceite de oliva y del medio de Leeming y se subcultivaron en SGA para determinar su dependencia de los lípidos. M. pachydermatis se identificó por su morfología microscópica y por su capacidad para crecer en SGA. La identificación de las levaduras dependientes de los lípidos se basó en la prueba de difusión de Tween propuesta por Guillot et al. (7), la prueba de asimilación de Cremophor EL y el desdoblamiento de la esculina descrito por Mayser et al. (10), y se utilizaron como controles las siguientes cepas tipo M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (donde NT significa neotipo), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T y M. obtusa CBS 7876T (amablemente proporcionadas por E. Guého y J. Guillot). La prueba de difusión de Tween permite diferenciar las especies dependientes de los lípidos en función de su capacidad para asimilar diversos ésteres de sorbitán polioxilados (Tweens 20, 40, 60 y 80). Cremophor EL contiene aceite de ricino y ácido ricinoleico y se utiliza como carácter clave adicional para la diferenciación de las especies M. furfur, M. slooffiae y M. sympodialis.

Las células típicas de Malassezia eran evidentes en los frotis teñidos con Diff-Quick del cerumen de siete gatos, pero sólo cinco de estas muestras fueron positivas al cultivo. Se aislaron especies de Malassezia en siete gatos (21,2%), pero en dos frotis teñidos con Diff-Quick de estos gatos no se detectaron las células típicas de Malassezia. No se aislaron levaduras pertenecientes a otras especies. En seis gatos (18,1%), sólo se aisló M. pachydermatis durante la primera semana de incubación (tres aislados se cultivaron a los 3 días, dos a los 5 días y uno a los 7 días). Sólo se aisló una especie dependiente de los lípidos en un gato a los 7 días de incubación. Este aislado formó colonias cremosas, lisas y umbonadas con un diámetro medio de 4,3 mm en agar Dixon modificado (36 g de extracto de malta, 6 g de peptona, 20 g de bilis de buey desecada, 10 ml de Tween 40, 2 ml de glicerol, 2 ml de ácido oleico, 12 g de agar por litro, pH 6,0) (4) tras 7 días de incubación a 32°C. La textura era friable y las células eran de ovoides a esféricas (de 1,5 a 3,0 μm por 1,5 a 4 μm). Se formaban brotes sobre una base amplia, y en algunas células se observaban filamentos cortos. La reacción de la catalasa fue positiva. Este aislado utilizó los cuatro Tweens (20, 40, 60 y 80), asimiló el Cremophor EL y fue débilmente positivo para el desdoblamiento de esculina, al igual que las cepas tipo M. furfur CBS 1878T yM. furfur CBS 7019NT (Fig.1). Según estos resultados, esta levadura dependiente de lípidos fue identificada como M. furfur(7, 10).