Biologie I Laboratorní příručka

To, co byste po této laboratoři měli umět vysvětlit někomu jinému:

• Složení
• Celkové zvětšení
• Binokulární
• Zorné pole
• Hloubka zaostření
• Inverzní jev

Slideshow

Základní informace

Mnoho organismů (bakterií) a částí organismů (buněk), které biologové zkoumají, je příliš malých na to, aby byly viditelné lidským okem. Ke zvětšení vzorků pro naše zkoumání používáme mikroskopy. Slovo mikroskop znamená „vidět malé“ a první primitivní mikroskop byl vytvořen v roce 1595.

Existuje několik typů mikroskopů, ale vy budete většinou používat složený světelný mikroskop. Tento typ mikroskopu používá k prohlížení malého vzorku viditelné světlo zaostřené přes dva objektivy, okulár a objektiv. Pouze buňky, které jsou dostatečně tenké, aby jimi světlo prošlo, budou světelným mikroskopem viditelné ve dvourozměrném obraze.

Dalším mikroskopem, který budete v laboratoři používat, je stereoskopický nebo pitevní mikroskop. Tento typ mikroskopu využívá viditelné světlo k zobrazení tlustších a větších vzorků, například hmyzu, ve 3D. Vzhledem k tomu, že si prohlížíte větší vzorky, je rozsah zvětšení pitevního mikroskopu menší než u složeného světelného mikroskopu.

Váš instruktor vás seznámí s částmi a funkcemi složených světelných mikroskopů, které budeme v průběhu semestru používat. Vyplňte tabulku na následující straně, která vám pomůže zapamatovat si tyto důležité informace. K této stránce se budete pravděpodobně často vracet. Zde je obrázek světelného mikroskopu, který si můžete označit a zapsat.

.

.

Část mikroskopu	Funkce
Okuláry (okuláry)
Rám
Otočný nosní nástavec
Stupeň
Předložky
Sklíčidla
Ovládací knoflík stupně
Kondenzátor
Irisová membrána
Podstupňová lampa (Iluminátor)
Hrubé nastavení
Přesné nastavení nastavení
Základní

Pravidla a pokyny pro používání složených světelných mikroskopů

Váš vyučující s vámi probere používání mikroskopu. Budou zopakovány správné kroky, které je třeba dodržet pro správné zaostření. Budete postupovat krok za krokem podle pokynů instruktora. I když jste s tímto typem mikroskopu obeznámeni, očekává se, že budete postupovat při přehledu zaostřování se zbytkem třídy.

1. Důležitá obecná pravidla:
   1. Mikroskop vždy přenášejte dvěma rukama – jednu ruku položte na rameno mikroskopu a druhou ruku pod základnu mikroskopu.
   2. Nedotýkejte se objektivů (tj. hrotů objektivů).
   3. Udržujte objektivy v poloze pro snímání a při přidávání nebo odebírání preparátů udržujte stolek nízko.
   4. Při velkých změnách výšky stolku se na mikroskop dívejte vždy z boku.
   5. Objektivy se čistí pouze speciálním papírem na objektivy a kapalinou na čištění objektivů.
   6. Nehrajte si na ruční práci – mikroskop se nesmí rozebírat. Poruchy nahlaste vyučujícímu.
2. Pro získání mikroskopu z laboratorní skříně:
   1. Nejprve uvolněte místo na stole pro mikroskop-vyhněte se přeplněnému pracovnímu prostoru.
   2. Mikroskopy jsou očíslovány podle toho, kde sedíte. Najděte číslo pod stolem a použijte odpovídající mikroskop.
   3. Mikroskop přenášejte DVĚMA rukama.
   4. Zajistěte elektrický kabel – nenechte ho viset ze stolu!“
3. Při vracení mikroskopu do laboratorní skříňky:
   1. Sklopte stolek.
   2. Otočte snímací objektiv do polohy nad stolkem.
   3. Sundejte preparát ze stolku.
   4. Očistěte preparát a objektiv pomocí dodané speciální kapaliny na čištění objektivů a papíru.
   5. Sestřeďte stolek tak, aby nevystupoval příliš daleko na obě strany.
   6. Zajistěte šňůru omotáním pod stolkem mikroskopu..
   7. Znovu nasaďte protiprachový kryt.
   8. Mikroskop přenášejte DVĚMA rukama.
   9. Vraťte mikroskop do stejné skříňky, ze které jste ho získali, a ujistěte se, že je v ruce venku.
4. Chcete-li mikroskop zaostřit:
   Podívejte se na mikroskop ze strany:
   1. Sklopte stolek tak daleko, jak to půjde.
      1. Otočte objektivy tak, aby skenovací objektiv mířil dolů na stolek.
      2. Nastavte stolek tak, aby byla apertura (otvor uprostřed stolku) vycentrovaná.
      3. Položte preparát na stolek a zajistěte jej pomocí svorky stolku. Jevištní svorka se pohybuje pouze v horizontální rovině jeviště a zajišťuje sklíčko tak, že se jen těsně dotýká pravého dolního rohu sklíčka.
      4. Pohybem jeviště vycentrujte vzorek na sklíčku pod objektivem.
      5. Posuňte jeviště nahoru téměř tak vysoko, jak to půjde, a dávejte pozor, aby se sklíčko nedotýkalo objektivu – podívejte se ze strany, abyste viděli, jak vysoko jeviště zvednout.
   2. Podívejte se přes okuláry:
      1. Pomocí knoflíku pro hrubé nastavení pohybujte stolkem směrem dolů, dokud se vzorek nezaostří, pak zaostřete.
      2. Pohybem stolku vycentrujte vzorek v poli mikroskopu.
   3. Podívejte se na mikroskop z boku:
      1. Pomalu otáčejte objektivem s nízkým výkonem (10x) do správné polohy.
   4. Podívejte se přes okuláry:
      1. V případě potřeby zaostřete pomocí knoflíku hrubého nastavení. Obvykle je nutné pouze minimální nastavení.
      2. V případě potřeby vycentrujte vzorek v poli.
   5. Pohlédněte na mikroskop ze strany:
      1. Velmi opatrně otočte vysoce výkonný objektiv na místo!
   6. Pohlédněte přes okuláry:
      1. Pouze pomocí knoflíku pro jemné nastavení zaostřete. V případě potřeby znovu zaostřete. (Pokud vám preparát „zmizel“, okamžitě se vraťte na nízký výkon a preparát znovu vycentrujte.)
      2. Při vyjímání preparátu vždy vraťte objektivy do polohy pro snímání a před zvednutím preparátu snižte stolek!

Část 1: Celkové zvětšení

Zvětšení je poměr velikosti obrazu pomocí mikroskopu ke skutečné velikosti objektu. Když řeknete, že zvětšení je 10, znamená to, že obraz, který vidíte pomocí mikroskopu, je desetkrát větší než při pohledu na vzorek pouhým okem. Nezapomeňte, že u složeného světelného mikroskopu zvětšujete dvěma objektivy, takže pro výpočet celkového zvětšení vynásobíte zvětšení objektivu zvětšením okuláru. Prohlédněte si mikroskop a pomocí níže uvedené tabulky vypočítejte celkové zvětšení pro jednotlivé objektivy:

	Objektiv	Okulární objektiv	= Celkové zvětšení
Objektiv
Nízký objektiv
Vysoký objektiv

Část 2: Inverzní jev

Získat diapozitiv s písmenem „e“, který je k dispozici ve třídě. Prohlédněte si sklíčko očima a poté jej umístěte na mikroskop. Pomocí zaostřovací sekvence si sklíčko prohlédněte při nízkém výkonu.

Postup

1. Nakreslete písmeno „e“ tak, jak se objeví při pohledu na sklíčko bez mikroskopu.
2. Nakreslete písmeno „e“ tak, jak se objeví při pohledu na sklíčko pod mikroskopem.
3. Přesunujte sklíčko doprava pomocí páčky mechanického stolku a zároveň se dívejte okulárem. Kterým směrem se pohybuje písmeno „e“?
4. Přesuňte sklíčko od sebe pomocí páčky mechanického stolku a zároveň se dívejte okulárem. Kterým směrem se pohybuje „e“?

Vyjádřete vlastními slovy inverzní jev.

Část 3: Zorné pole

Zorné pole je velikost vzorku, který vidíte při pohledu přes objektivy. Při větších zvětšeních se zorné pole zmenšuje.

Postup

Přiložte modré plastové pravítko přes clonu jeviště tak, aby okraj pravítka byl viditelný jako svislá čára podél průměru zorného pole. Odhadněte velikost pole v milimetrech pro každý z objektivů.

Scan __________ Low (10X) __________ High (40X) __________

Část 4: Hloubka ostrosti

Hloubka ostrosti je tloušťka vzorku, která zůstává zaostřena při daném zvětšení. Hloubka ostrosti se při větších zvětšeních zmenšuje.

Postup

Pořiďte si barevné nitkové sklíčko a prohlédněte si ho při skenování nebo nízkém výkonu. Poté určete, která barevná nit je:

• Nahoře
• Uprostřed
• Na dně

Nápověda: pomocí pokynů pro zaostření zaostřete na oblast, kde se tři nitě kříží. Pomocí jemného zaostření rozeznáte pořadí vláken.

Část 5: Zhotovení mokré montáže

V průběhu semestru budete muset úspěšně zhotovit řadu jednoduchých preparátů na diapozitivy zvaných „mokré montáže“. Pozorovaný preparát se umístí na čisté sklíčko, přidá se kapka nebo dvě vody a přes vodu a preparát se opatrně umístí krycí sklíčko. Váš instruktor vám tuto techniku předvede.

Zhotovte mokrý preparát z rybniční vody podle následujícího postupu:

1. Na čisté podložní sklíčko umístěte kapku rybniční vody pomocí plastové jednorázové pipety.
2. Překryjte rybniční vodu na sklíčku krycím sklíčkem. Snažte se přiložit krycí sklíčko pod úhlem, abyste zabránili vzniku vzduchových bublin.
3. Otřete přebytečnou tekutinu na sklíčku.
4. Přiložte sklíčko k mikroskopu a pozorujte vzorek.
   1. Začněte na skenovacím objektivu
   2. Podle potřeby opatrně přepínejte na nízký a vysoký objektiv.

Snad uvidíte ve vodě v jezírku živé organismy. Pokud uvidíte zelený materiál, jedná se pravděpodobně o nějaký druh rostliny. Podívejte se, zda se v ní něco nepohybuje. Na níže uvedeném místě popište, co pozorujete pod mikroskopem, a nakreslete jednoduchý obrázek.

Část 6: Stereoskopický pitevní mikroskop

Váš instruktor vám předvede správné používání pitevního mikroskopu. Tyto mikroskopy obecně poskytují menší zvětšení než složený mikroskop, který používáte.

Postup

Prohlédněte si preparáty dostupné na laboratorním stole pomocí pitevního mikroskopu. Všimněte si, že mikroskop má dva zdroje světla, jeden ze základny a druhý shora. Vzorky nejsou vždy upevněny na sklíčku. Všimněte si také, že když si prohlížíte objekty pod pitevním mikroskopem, jsou trojrozměrné.

Čištění mikroskopu a péče o něj

1. Popiš, jak a čím máš čistit objektiv mikroskopu.
2. Vyjmenuj čtyři věci, které máš udělat, když na konci laboratoře skončíš s používáním mikroskopu.

Vyjmenuj čtyři věci, které máš udělat, když skončíš s používáním mikroskopu.