Úvod
Tkáňové bloky zalité do parafínu obvykle označují vzorky tkání zalité do formalínu (FFPE), které se již mnoho desetiletí používají v různých terapeutických aplikacích a výzkumu. Jedná se o metodu používanou k uchování a přípravě biospecifických vzorků pro použití v experimentálním výzkumu, vyšetření, diagnostice a terapeutickém vývoji. Vzorek tkáně se nejprve konzervuje fixací pomocí formalinu nebo formaldehydu, aby se zajistilo, že životně důležité struktury a proteiny uvnitř tkáně zůstanou co nejblíže stavu, kdy byly ještě součástí hostitele. Po fixaci se vloží do parafínového bloku, aby se usnadnilo řezání a montáž na mikroskopická sklíčka pro účely vyšetření.
Postup
Tkáně se nejprve odebírají z nemocných i normálních hostitelů. U onkologických bioptátů onkolog často porovnává primární nádor se vzorky, které jsou získány ze vzdálených metastatických ložisek. Získané tkáně obvykle měří jen několik centimetrů v závislosti na povaze a zdroji a tkáni. Bezprostředně po excizi se biospecifikum ponoří na 18 až 24 hodin do 10% neutrálního pufrovaného formalínu, aby tkáň ztvrdla. Poté se dehydratuje a očistí pomocí zvyšujících se koncentrací ethanolu. Poté se vloží do parafínu imunohistochemické kvality, který se používá speciálně pro vkládání tkání fixovaných formalínem. Jedním z nejdůležitějších faktorů je doba fixace, protože příliš brzy fixované tkáně mohou být pro molekulárně biologické studie nepoužitelné. Doba fixace musí být dostatečně dlouhá, aby byla zajištěna konzervace.
Po získání se se vzorky zachází opatrně, aby se zachovala jejich kvalita. Nedostatečné zacházení může vést k projevení neobvyklých vlastností, které mohou ovlivnit výsledky výzkumu nebo dedukce. Způsob přípravy obvykle závisí na požadavcích výzkumného týmu. Může se jednat o specifikace týkající se účelu tkáně, velikosti nebo řezu tkáně. Dobrým příkladem může být řez svalu podél „zrna“ svalových vláken nebo napříč nimi. Po celou dobu přípravy vzorků se na ní podílí certifikovaný lékařský patolog, který zajišťuje přesnost postupu a také hodnocení kvality.
Po dokončení přípravy se vzorky ukládají do tkáňových bank. Měly by se také uchovávat užitečné záznamy, jako jsou demografické údaje a informace o tom, kdy byla tkáň odebrána nebo uchována, protože mohou být užitečné pro výzkumný tým. Mezi další důležité informace, které by měly být uchovávány, patří podepsané formuláře souhlasu a právní dokumenty spojené s bioprvkem, protože mohou ovlivnit použitelnost bioprvku ve výzkumu a klinických studiích.
Použití
Tkáňové bloky vložené do parafínu mají ve výzkumu mnoho využití. Tyto tkáňové bloky se často používají v imunohistochemii, kde se tkáňové řezy upevňují na sklíčko. Tyto řezy se pak koupou pomocí roztoku, který obsahuje protilátky, jež se vážou na proteiny a struktury. Může být také provedeno barvení, které pomáhá vizualizovat protilátky, což ukazuje umístění struktur, které jsou ve vzorku přítomny. Tyto informace mohou mít zásadní význam pro diagnostiku nemocí, jako je Alzheimerova choroba nebo rakovina. Informace získané pomocí imunohistochemie jsou také zásadní pro mnoho projektů týkajících se rakoviny, které se dnes provádějí v laboratořích. Některé z terapeutických oblastí, kde se vzorky tkání běžně používají, jsou:
-
Imunologie – analyzují se reakce imunitního systému v nemocném i zdravém stavu. Studium tkáňových vzorků od pacienta s autoimunitním onemocněním pomáhá určit příčinu a vyvinout terapii pro postižené.
-
Hematologie – parafinové tkáňové bloky mají zásadní význam při studiu různých krevních a souvisejících poruch. Hematologie je klíčový obor, který pomohl s objevem mnoha léků na nemoci související s krví a jejími složkami. Některé studie, které s tímto oborem souvisejí, zahrnují studium kostní dřeně, které může zahrnovat genetiku, toxikologii a regeneraci tkání.
-
Onkologie – parafínové tkáňové bloky jsou důležité v onkologii, protože zachované nádorové tkáně mají charakteristickou morfologii, která se v jiných tkáních nevyskytuje. Výzkumné týmy často používají tyto vzorky k hledání proteinů, které mohou pomoci při diagnostice a hodnocení onemocnění. Nádorové tkáně fixované formalínem a zalité do parafínu (FFPE) by obecně měly obsahovat 60 % nádoru.
-
Srovnatelné – existují také tkáňové bloky zalité do parafínu, které jsou zdravou tkání odebranou od zdravých dárců. Tyto tkáně se používají pro srovnávací účely a jsou také důležité pro výzkum a vývoj.
Nevýhoda
U tkáňových bloků zalitých do parafínu proces fixace obvykle vyžaduje použití formalinu nebo formaldehydu, který denaturuje proteiny, které jsou ve vzorku tkáně. To může způsobit, že proteiny jsou neviditelné pro protilátky, které jsou speciálně vyvinuty k jejich detekci. Jako kompenzace byly vyvinuty techniky získávání antigenů, které specificky obnovují proteiny, DNA a RNA z těchto tkáňových bloků. To pomáhá otevřít rozsáhlý archiv zachovaného a anotovaného materiálu pro biochemické a molekulárně biologické studie.
Závěr
Kvalita parafinových tkáňových bloků má zásadní význam pro práci využívající tyto vzorky jako zdroj proteinů, DNA a RNA. Důvodem je skutečnost, že i nejlépe zachovaná tkáň bude obsahovat částečně degradované neaktivní proteiny, DNA a RNA
.