Braz J Med Biol Res, říjen 2003, Volume 36(10) 1447-1454
Gen pro 5alfa-reduktázu typu 1, ale ne pro typ 2, je exprimován v anagenních chloupcích vytrhaných z oblasti temene vlasové pokožky hirsutních žen a normálních jedinců
I.O. Oliveira1,2, C. Lhullier1, I.S. Brum1 a P.M. Spritzer1,3
1Departamento de Fisiologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil
2Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, RS, Brasil
3Unidade de Endocrinologia Ginecológica, Serviço de Endocrinologia, Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Porto Alegre, RS, Brasil
Abstrakt
Abstrakt 
Cílem této studie bylo stanovit expresi genů pro typ 1 (SDR5A1) a typ 2 (SDR5A2) 5a-.reduktázy ve vlasech na hlavě vytrhaných 33 pacientkám s hirsutismem (20 se syndromem polycystických vaječníků a 13 s idiopatickým hirsutismem) a porovnat ji s 10 muži a 15 normálními ženami. Exprese SDR5A1 a SDR5A2 byla hodnocena pomocí RT-PCR s použitím genu všudypřítomně exprimovaného proteinu ß2-mikroglobulinu jako vnitřní kontroly. Výsledky jsou vyjádřeny v arbitrárních jednotkách ve vztahu k absorbanci ß2-mikroglobulinu (průměr ± SEM). Exprese SDR5A2 nebyla zjištěna v žádném vzorku vlasů analyzovaném v této studii. Nebyly zjištěny žádné rozdíly v hladinách mRNA SDR5A1 mezi muži a normálními ženami (0,78 ± 0,05 vs 0,74 ± 0,06, v tomto pořadí). Exprese genu SDR5A1 v buňkách vlasů vytrhaných z pokožky hlavy normálních žen (0,85 ± 0,04) a žen se syndromem polycystických vaječníků (0,78 ± 0,05) a idiopatickým hirsutismem (0,80 ± 0,06) byla také podobná. Tyto výsledky naznačují, že exprese genu SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech z vrcholové oblasti pokožky hlavy zřejmě nesouvisí s rozdíly v růstu vlasů pozorovanými mezi normálními muži a ženami a pacienty s hirsutismem. K objasnění mechanismu působení androgenů na proces růstu vlasů a souvisejících onemocnění je zapotřebí dalších studií, které by zkoumaly expresi genů 5a-reduktázy v jiných folikulárních kompartmentech vlasové pokožky, jako jsou dermální papily, a také ve vlasových folikulech z jiných míst těla.
Klíčová slova:
:
Úvod
Androgeny jsou hlavními regulátory růstu lidských vlasů a jsou spojeny s jednou z hlavních klinických poruch růstu vlasů, a to s hirsutismem. Tento stav odpovídá nadměrnému růstu ochlupení u žen s mužským vzorem rozložení ochlupení na těle. Přítomnost hirsutismu může signalizovat stavy spojené se zvýšenou sekrecí androgenů vaječníky a/nebo nadledvinami, jako je syndrom polycystických vaječníků (PCOS), nádory vylučující androgeny a neklasická hyperplazie nadledvin, nebo může být důsledkem periferní hypersenzitivity na cirkulující androgeny (idiopatický hirsutismus, IH) (1-3). Přestože tento stav obecně neohrožuje život, je pro pacientky značně obtěžující a má významný negativní psychosociální dopad. Zkoumání účinků androgenů na růst vlasů v přítomnosti hirsutismu by mělo zlepšit naše znalosti o biologii lidských vlasových folikulů.
Účinek všech aktivních androgenů na cílové buňky je zprostředkován jejich vazbou na stejný jaderný androgenní receptor. Předchozí studie syndromů androgenní rezistence odhalily význam androgenního receptoru pro růst vlasů závislý na androgenech (4-6). Nedávno byla pozorována zvýšená schopnost vázat androgeny ve vlasových buňkách pokožky hlavy plešatících mužů (7). Dosud však nebyl zjištěn žádný konzistentní rozdíl v počtu nebo funkci androgenního receptoru u vlasatých pacientů ve srovnání s normálními jedinci (8,9).
Vlasové folikuly mají autonomní kontrolu nad metabolismem androgenů a upravují produkci a degradaci steroidních hormonů podle místních požadavků (10). Za normálních podmínek má 5a-reduktáza klíčovou roli při působení androgenů na vlasové folikuly, kdy přeměňuje testosteron na účinnější androgen dihydrotestosteron (11,12). Studie molekulárního klonování charakterizovaly dva geny, které kódují izoenzymy 5a-reduktázy typu 1 a typu 2 (13,14). Izoenzym 5a-reduktázy převažující v kůži je typ 1 (SDR5A1) (15), který má 60% homologii s 5a-reduktázou typu 2 (SDR5A2), která je charakteristická pro prostatu (14). Zvýšená aktivita 5a-reduktázy byla prokázána v genitálních a pubických kožních fibroblastech pacientek s hirsutním postižením ve srovnání s kůží normálních žen (8,16). Tyto studie zaznamenaly zvýšení aktivity 5a-reduktázy i u IH, která je charakterizována absencí zvýšených plazmatických hladin androgenů (17). Navíc kůže pubických orgánů pacientek s hirsutním syndromem exprimuje stejnou izoformu SDR5A1 jako kůže pubických orgánů normálních osob, zatímco SDR5A2 je exprimována především v kůži genitálií normálních osob i pacientek s hirsutním syndromem (18). Fyziologická úloha izoenzymů 5a-reduktázy však není zcela objasněna a jejich distribuce v různých kompartmentech kůže je stále nejasná. Některé imunohistochemické studie a studie enzymové aktivity naznačují převažující expresi enzymu SDR5A1 v mazových žlázách, ale také v potních žlázách, epidermálních buňkách, buňkách kořenových pochev a dermálních papil z vlasových folikulů (19-21), zatímco SDR5A2 je v těchto kompartmentech exprimován pouze ve velmi nízkých hladinách. Jiné studie naopak prokázaly odlišnou distribuci těchto izoenzymů uvnitř pilosebaceózní jednotky (22-24). Zdá se, že v kompartmentech vlasového folikulu je vyšší distribuce SDR5A1 ve srovnání s SDR5A2. Navíc vzhledem k tomu, že keratinocyty vlasového kořínku vykazují vysokou expresi genu SDR5A1, hrají pravděpodobně důležitou roli v metabolismu androgenů ve vlasových folikulech.
Cílem této studie bylo posoudit expresi genů SDR5A1 a SDR5A2 v buňkách vlasového kořínku v oblasti temene vlasové pokožky od pacientů s hirsutem a porovnat ji s normálními jedinci obou pohlaví.
Pacienti a metody
Subjekty
Studijní soubor zahrnoval ženy konzultované pro hirsutismus, které byly postupně navštíveny během 6 měsíců na gynekologicko-endokrinologickém oddělení Hospital de Clínicas de Porto Alegre v Brazílii. Do studie bylo vybráno 33 pacientek ve věku od 12 do 42 let. U 20 pacientek byl diagnostikován PCOS a u 13 IH. Diagnóza PCOS byla založena na fyzikálních znacích hyperandrogenismu, poruchách menstruačních cyklů, zvýšené hladině luteinizačního hormonu (LH) v séru nebo poměru LH/folikulostimulačního hormonu, zvýšené hladině celkového testosteronu a/nebo volného androgenního indexu (FAI), ultrazvukovém průkazu oboustranně zvětšených polycystických vaječníků (25,26) a nepřítomnosti ovariálního nebo adrenálního nádoru nebo Cushingova syndromu. IH byla diagnostikována podle dřívějšího popisu (27) u hirsutních pacientek s pravidelnými ovulačními cykly (hladina progesteronu v luteální fázi vyšší než 3,8 ng/ml), normální hladinou androgenů a bez známého základního onemocnění.
Pacientky s pozdní (neklasickou) vrozenou hyperplazií nadledvin nebyly do studie zařazeny na základě vysoké plazmatické hladiny 17-hydroxyprogesteronu (>5 ng/ml) a/nebo jejího výrazného zvýšení po stimulaci ACTH (>12 ng/ml) (28,29). Vyloučeni byli rovněž pacienti s hyperprolaktinémií (sérové hladiny prolaktinu vyšší než 20 µg/l při dvou různých příležitostech).
Do studie, která byla schválena etickou komisí Hospital de Clínicas de Porto Alegre, bylo rovněž vybráno patnáct normálních žen s pravidelným menstruačním cyklem ve věku 16-37 let a deset mužů ve věku 16-29 let. Od každého subjektu byl získán informovaný souhlas. Žádný ze subjektů neužíval nejméně 3 měsíce před studií žádné léky, o nichž je známo, že ovlivňují hladiny androgenů, estrogenů nebo gonadotropinů v séru.
Hladiny mRNA SDR5A1 a SDR5A2 byly hodnoceny pomocí reverzní transkripčně-polymerázové řetězové reakce (RT-PCR) ve vlasových buňkách vytržených z vrcholové části vlasové pokožky normálních mužů, normálních žen a pacientů s hirsutizací.
Protokol studie
Antropometrická měření zahrnovala tělesnou hmotnost, výšku a index tělesné hmotnosti (BMI = aktuální naměřená hmotnost v kg dělená výškou v m2). Skóre hirsutismu bylo hodnoceno metodou Ferriman-Gallwey (30) s vyloučením oblasti dolních končetin a předloktí.
Hormonální hodnocení bylo provedeno mezi 2. a 10. dnem menstruačního cyklu nebo v kterýkoli den, kdy byly pacientky amenoreické. Po nočním lačnění byly odebrány vzorky krve z antecubitální žíly pro stanovení LH, globulinu vázajícího pohlavní hormony (SHBG) a celkového testosteronu. Všechny vzorky byly odebrány mezi 8. a 10. hodinou ranní. FAI byl odhadnut vydělením celkového testosteronu (nmol/l) SHBG (nmol/l) x 100.
Testy
Celkový testosteron byl měřen radioimunoanalýzou s dvojitou protilátkou (ICN, Costa Mesa, CA, USA), s detekčním limitem 0.04 ng/ml a intra- a interassay koeficientem rozptylu (CV) 10, resp. 15 %; SHBG byl měřen imunochemiluminometrickým testem (ICMA; DPC, Los Angeles, CA, USA) s limitem detekce 0,2 nmol/l a intra- a interassay CV 5,0, resp. 8,0 %. LH byl měřen metodou ICMA s detekčním limitem 0,7 mIU/ml a intra- a interassay CV 5,2, resp. 8,0 %.
Protokol RT-PCR
Vytrhané anagenní vlasy byly odebrány z temene vlasové pokožky všech subjektů a byly okamžitě zmrazeny v tekutém dusíku a převezeny do laboratoře k provedení testů. Extrakce celkové RNA a syntéza cDNA byly provedeny podle předchozího popisu (31). Vytrhané vlasové kořínky byly homogenizovány ve fenol-guanidin isothiokyanátu (Trizol, Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA). Celková RNA byla extrahována chloroformem a vysrážena isopropanolem odstředěním 12 000 g při 4 °C. Pelet RNA byl dvakrát promyt 75% ethanolem, resuspendován ve vodě ošetřené diethylpyrokarbonátem a kvantifikován pomocí absorbance při 260 nm.
První vlákno cDNA bylo syntetizováno z 5 µg celkové RNA pro všechny reakce pomocí SuperScript Preamplification System (Gibco-BRL). Po denaturaci templátové RNA a primerů při 70 ºC po dobu 10 min byla přidána reverzní transkriptáza v přítomnosti 20 mM Tris-HCl, pH 8,4, plus 50 mM KCl, 2,5 mM MgCl2, 0,5 mM dNTP mix a 10 mM dithiothreitol a inkubováno při 42 ºC po dobu 55 min. Směs se zahřála na 70 °C, aby se reakce zastavila, a poté se 20 min inkubovala s RNázou E. coli při 37 °C, aby se zničila nepřepsaná RNA. Templát (cDNA) použitý v různých testech PCR byl získán ze stejné reakce reverzní transkripce. PCR se prováděla v konečném objemu 50 µl. Dva mikrolitry reakce syntézy prvního vlákna (s předpokládaným výtěžkem cDNA 10 ng) byly denaturovány při 94 °C po dobu 3 min (2 min pouze pro ß2-mikroglobulin) v přítomnosti 20 mM Tris-HCl, pH 8,4, plus 50 mM KCl a 1,5 mM MgCl2. Po tomto horkém startu bylo přidáno 1,25 U Taq DNA polymerázy spolu se stejným pufrem Tris-HCl, 1,5 mM MgCl2, 0,4 µM sense a antisense primerů a 0,2 mM směsi dNTP.
Fragment cDNA SDR5A1 (24) o délce 368 bp a fragment cDNA SDR5A2 (14) o délce 566 bp byly amplifikovány pomocí primerů navržených tak, aby překlenuly hranice intronů a exonů, aby se zabránilo amplifikaci jakékoli kontaminující genomové DNA. Pro normalizaci množství cDNA v každém vzorku byl amplifikován 623-bp fragment cDNA odpovídající všudypřítomnému proteinu ß2-mikroglobulinu (32). Sekvence cDNA primerů SDR5A1 a SDR5A2 a ß2-mikroglobulinu jsou uvedeny v tabulce 1. PCR byla standardizována testováním počtu cyklů (20 až 45) a amplifikace probíhala v lineárním rozsahu. Konečné podmínky PCR byly následující: 35 cyklů (45 s při 94 °C, 45 s při 60 °C, 90 s při 72 °C, 10 min při 72 °C) pro SDR5A1, 40 cyklů (1 min při 94 °C, 1 min při 65 °C, 2 min při 72 °C, 5 min při 72 °C) pro SDR5A2 a 30 cyklů (1 min při 94 °C, 1 min při 55 °C, 1 min při 72 °C, 5 min při 72 °C) pro ß2-mikroglobulin. cDNA z disociovaných buněk lidské prostaty byla použita jako pozitivní kontrola pro všechny reakce PCR. Do negativních reakcí nebyla přidána žádná cDNA. Vzorek směsi PCR (15 µl) byl velikostně frakcionován na 1,5-2,0% agarózovém gelu obarveném ethidiumbromidem, spuštěn při 100 V a vizualizován pod UV světlem. Očekávané pásy byly kvantifikovány denzitometrickou analýzou pomocí systému pro zpracování obrazu (ImageMaster VDS, Pharmacia Biotech, Uppsala, Švédsko).
Statistická analýza
Údaje jsou uvedeny jako střední hodnoty ± SEM, pokud není uvedeno jinak. Průměry skupin byly porovnány Studentovým t-testem nebo jednocestnou analýzou rozptylu (ANOVA) s následným Duncanovým testem a hodnoty mediánů byly porovnány Mannovým-Whitneyho testem. Rozdíly byly považovány za statisticky významné při P < 0,05. Všechny analýzy byly provedeny pomocí programu Statistical Packages for the Social Sciences (SPSS, Inc, Chicago, IL, USA).
Výsledky
Tabulka 2 shrnuje antropometrické a hormonální údaje u pacientek s PCOS a IH. Mezi oběma skupinami pacientek s hirsutismem nebyly pozorovány žádné významné rozdíly, pokud jde o věk nebo klinické skóre hirsutismu. Nicméně hirsutní pacientky s PCOS vykazovaly vyšší BMI a vykazovaly významně vyšší hladiny testosteronu, FAI a LH než skupina s IH. Koncentrace SHBG byly nižší ve skupině s PCOS než ve skupině s IH.
Exprese genu SDR5A2 nebyla v této studii zjištěna v žádném vzorku vlasů na hlavě analyzovaném pomocí RT-PCR (obrázek 1).
Obrázek 2 ukazuje hladiny mRNA SDR5A1 ve vlasových buňkách vytržených z vlasové pokožky normálních subjektů. Exprese SDR5A1, prezentovaná jako arbitrární jednotky ve vztahu k absorbanci ß2-mikroglobulinu, byla podobná u mužů (0,78 ± 0,05) a normálních žen (0,74 ± 0,06). Dále nebyly pozorovány žádné významné rozdíly v expresi SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech mezi normálními ženami (0,85 ± 0,04) a hirsutními skupinami PCOS (0,78 ± 0,04) nebo IH (0,80 ± 0,06) (obr. 3).
|
|
Obr. 1. Exprese SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech u žen s PCOS (0,78 ± 0,04) nebo IH (0,80 ± 0,06). Reprezentativní agarózový gel obarvený ethidium bromidem, který neprokazuje expresi mRNA SDR5A2 pomocí RT-PCR ve vlasových buňkách vytržených z vlasové pokožky mužů (1 až 9), normálních žen (10 až 17) a pacientů s hirsutizací: Skupina PCOS (18 až 31) a skupina IH (32 až 39). Fragment o délce 566 pb odpovídá SDR5A2 (5a-R2) a fragment o délce 623 pb odpovídá ß2-mikroglobulinu (ß2-m). Amplifikace SDR5A2 byla vizualizována pouze v disociovaných prostatických buňkách použitých jako pozitivní kontrola (+). |
|
|
Obrázek 2. Reprezentativní gel zobrazující hladiny mRNA SDR5A1 stanovené pomocí RT-PCR ve vlasových buňkách vytržených z vlasové pokožky mužů (1 až 7) a normálních žen (8 až 14). Fragment o délce 368 bp odpovídá SDR5A1 (5a-R1) a fragment o délce 623 bp odpovídá ß2-mikroglobulinu (ß2-m). Produkty RT-PCR byly vizualizovány na agarózovém gelu obarveném ethidiumbromidem. + = pozitivní kontrola. |
|
|
Obrázek 3. Reprezentativní gel zobrazující hladiny mRNA SDR5A1 stanovené pomocí RT-PCR ve vlasových buňkách vytržených z vlasové pokožky normálních žen (1 až 14) a obou skupin pacientek s vlasovou dysfunkcí (PCOS: 15 až 26; IH: 27 až 35). Fragment o délce 368 bp odpovídá SDR5A1 (5a-R1) a fragment o délce 623 bp odpovídá ß2-mikroglobulinu (ß2-m). Produkty RT-PCR byly vizualizovány na agarózovém gelu obarveném ethidium bromidem. |
Diskuse
Ačkoli je aktivita kožní 5a-reduktázy spojena s hirsutismem, specifickou roli a identifikaci izoenzymu podílejícího se na tomto klinickém stavu růstu ochlupení je třeba ještě lépe definovat. V této studii jsme zkoumali expresi mRNA obou typů 5a-reduktázy ve vytrhaných anagenních vlasových buňkách vlasové pokožky pacientů s hirsutismem.
Gen SDR5A1 byl exprimován ve vytrhaných vlasových buňkách získaných z temene vlasové pokožky normálních subjektů. Jiné studie prokázaly podobné výsledky i při zkoumání mRNA SDR5A1 v kultivovaných folikulárních keratinocytech (24,33). Vytrhané anagenní vlasy jsou tvořeny převážně keratinocytárními buňkami tvořícími vnější i vnitřní kořenové pochvy. Pochva pojivové tkáně, spodní cibulka, buňky dermální papily a mazová žláza ve vytrhaných vlasech chybí. Naše data tedy potvrzují genovou expresi SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech a jsou ve shodě s jinými, které prokázaly imunoreaktivitu 5a-reduktázy v buňkách kořenových pochev vlasových folikulů (20,23).
V této studii se hladiny mRNA SDR5A1 z vytrhaných vlasů na hlavě nelišily mezi normálními muži a ženami. Předchozí studie rovněž popsaly podobnou aktivitu 5a-reduktázy ve vlasových folikulech mužů a žen (12,34). Naopak vyšší aktivita 5a-reduktázy ve vzorcích pubické kůže byla zjištěna u normálních mužů než u normálních žen (1). Souhrnně tyto výsledky naznačují, že u normálních jedinců se regulace 5a-reduktázy zřejmě liší mezi folikulárními keratinocyty vlasové pokožky a fibroblasty pubické kůže.
Zdá se, že buňky vlasových folikulů vlasové pokožky nejsou hlavním cílem hirsutismu. Získávání vzorků z obličeje pacientů s hirsutismem však naráží na určité etické obtíže. Kromě toho existuje pouze několik literárních zpráv o molekulárních mechanismech buněk vlasových folikulů pokožky hlavy v přítomnosti hirsutismu (9). Oblast vlasové pokožky hlavy je dobře známým místem citlivým na androgeny u obou pohlaví a je relativně snadné získat vzorek vlasů vlasové pokožky hlavy. Proto je zajímavé zkoumat některé aspekty metabolismu androgenů v buňkách vytrhaných vlasů z pokožky hlavy, zejména pokud je možné srovnávat subjekty s endogenní expozicí vyšším (PCOS) nebo normálním (IH) hladinám cirkulujících androgenů.
Nepozorovali jsme žádné rozdíly v hladinách mRNA SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech ani mezi pacientkami s hirsutismem a normálními ženami, ani mezi normálními muži a ženami. Pacienti s vysokou hladinou androgenů v séru (skupina PCOS) navíc vykazovali stejnou expresi genu SDR5A1 jako pacienti s IH a normální hladinou androgenů. Ačkoli je SDR5A1 izoenzymem převažujícím v kůži (14), současné výsledky naznačují, že cirkulující androgeny pravděpodobně nepřispívají k expresi genu SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech pokožky hlavy, což naznačuje, že SDR5A1 není klíčovým izoenzymem v lokálním metabolismu androgenů v pokožce hlavy. Na druhou stranu byla prokázána účinnost inhibitoru 5a-reduktázy finasteridu při léčbě vypadávání vlasů u mužů (35) a také u IH (36,37). Finasterid je perorálně účinný inhibitor, který přednostně blokuje 5a-reduktázu typu 2, ale může také inhibovat izoenzym typu 1, což způsobuje výrazný pokles hladin dihydrotestosteronu a 3a-androstendiol-glukuronidu. Nemá afinitu k androgennímu receptoru ani androgenní, estrogenní, progestační nebo jiné steroidní účinky (38). Ve shodě s našimi výsledky tyto studie naznačily, že 5a-reduktáza typu 2 má pravděpodobně kritičtější roli v procesu růstu vlasů a souvisejících klinických stavech.
Současné výsledky ukazují, že gen SDR5A2 nebyl exprimován ve folikulárních keratinocytech žádného subjektu, ani u mužů, ani u normálních žen, ani u pacientů s hirsutem. Předchozí studie popsaly přednostní lokalizaci mRNA a enzymové aktivity SDR5A2 (39,40) v buňkách dermální papily, ačkoli imunoreaktivita SDR5A2 byla nalezena také v keratinocytech vlasového folikulu (20,22). Zjevné rozdíly v expresi proteinů mezi těmito studiemi lze alespoň částečně vysvětlit rozdílnými metodami imunohistochemické analýzy kvalitativních dat. Pokud jde o absenci exprese genu SDR5A2, popsanou v této studii, citlivější metody analýzy genové exprese, např. PCR v reálném čase, tuto otázku v budoucnu možná objasní.
Nezkoumali jsme genovou expresi izoenzymů 5a-reduktázy v jiných folikulárních kompartmentech, jako jsou dermální papily, protože tyto buňky nejsou přítomny ve vytrhaných izolovaných vlasech. Buňky dermální papily se získávají pouze excizní biopsií, což je invazivní a stresující metoda. Bude však velmi zajímavé prozkoumat izoenzymy 5a-reduktázy v buňkách dermální papily od pacientů s hirsutem, protože se předpokládá, že tyto buňky mohou být přímým cílem androgenů ve vlasových folikulech a regulovat aktivitu vlasové matrix, melanocytů a keratinocytů pomocí parakrinních signálů (10).
Zdá se, že exprese genu SDR5A1 ve folikulárních keratinocytech z vrcholové oblasti vlasové pokožky nesouvisí s rozdíly v růstu vlasů pozorovanými mezi normálními muži a ženami a pacienty s hirsutismem. Další zkoumání regulace exprese genu 5a-reduktázy v buňkách vlasových folikulů na různých místech těla může pomoci objasnit zajímavý mechanismus působení androgenů na proces růstu vlasů a související onemocnění.
1. Kuttenn F, Mowszowicz I, Schaison G & Mauvais-Jarvis P (1977). Produkce androgenů a metabolismus kůže u hirsutismu. Journal of Endocrinology, 75: 83-91.
2. New MI, Lorenzen F, Lerner AJ et al. (1983). Genotypizace deficitu steroidní 21 hydroxylázy: hormonální referenční údaje. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 57: 320-326.
3. Azziz R, Carmina E & Sawaya ME (2000). Idiopatický hirsutismus. Endocrine Reviews, 21: 347-362.
4. Mauvais-Jarvis P, Bercovici JP & Gauthier F (1969). In vivo studie metabolismu testosteronu kůží normálních mužů a pacientů se syndromem testikulární feminizace. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 29: 417-421.
5. Griffin JE & Wilson JD (1977). Studies on the pathogenesis of the incomplete forms of androgen resistance in man [Studie o patogenezi neúplných forem androgenní rezistence u mužů]. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 45: 1137-1143.
6. Kuttenn F, Mowszowicz I, Wright F, Baudot N, Jaffiol C, Robin M & Mauvais-Jarvis P (1979). Mužský pseudohermafroditismus: srovnávací studie jednoho případu deficitu 5a-reduktázy se třemi kompletními formami testikulární feminizace. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 49: 861-865.
7. Hibberts NA, Howell AE & Randall VA (1998). Plešatící buňky vlasových folikulů dermální papily obsahují vyšší hladiny androgenních receptorů než buňky z neplešatící vlasové pokožky. Journal of Endocrinology, 156: 59-65.
8. Mowszowicz I, Melanitou E, Doukani A, Wright F, Kuttenn F & Mauvais-Jarvis P (1983). Androgenní vazebná kapacita a 5-reduktázová aktivita v pubických kožních fibroblastech od pacientů s hirsutizmem. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 56: 1209-1213.
9. Oliveira IO, Lhullier C, Brum IS & Spritzer PM (2003). Genová exprese 17ß hydroxysteroid dehydrogenázy typu 2 ve vlasech vlasaté pokožky hlavy žen. Steroids (v tisku).
10. Randall VA (1994). Androgeny a růst lidských vlasů. Clinical Endocrinology, 40: 439-457.
11. Hay JB & Hodgins MB (1973). Metabolismus androgenů in vitro lidskou kůží obličeje a podpaží. Journal of Endocrinology, 59: 475-486.
12. Takayasu S, Wakimoto H, Itami S & Sano S (1980). Aktivita testosteron 5a-reduktázy v různých tkáních lidské kůže. Journal of Investigative Dermatology, 74: 187-191.
13. Andersson S, Bischop RW & Russell DW (1989). Exprese, klonování a regulace steroidní 5a-reduktázy, enzymu nezbytného pro mužskou sexuální diferenciaci. Journal of Biological Chemistry, 264: 16249-16255.
14. Andersson S, Berman DM, Jenkins EP & Russell DW (1991). Delece genu steroidní 5a-reduktázy 2 u mužského pseudohermafroditismu. Nature, 354: 159-161.
15. Harris G, Azzolina B, Baginsky W, Cimis G, Rasmusson G, Tolman R, Raetz C & Ellsworth K (1992). Identifikace a selektivní inhibice izoenzymu steroidní 5a-reduktázy v lidské pokožce hlavy. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 89: 10787-10791.
16. Lobo RA, Goebelsmann U & Horton R (1983). Důkazy o významu dějů v periferních tkáních při vzniku hirsutismu u syndromu polycystických vaječníků. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 57: 393-397.
17. Serafini P & Lobo RA (1985). Zvýšená aktivita 5-reduktázy u idiopatického hirsutismu. Fertility and Sterility, 43: 74-78.
18. Mestayer CH, Berthaut I, Portois M-C, Wright F, Kuttenn F, Mowszowicz I & Mauvais-Jarvis P (1996). Predominantní exprese 5a-reduktázy typu 1 v pubické kůži normálních jedinců a pacientů s hirsutizmem. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 81: 1989-1993.
19. Luu-The V, Sugimoto Y, Puy L, Labrie Y, Solache IL, Singh M & Labrie F (1994). Charakterizace, exprese a imunohistochemická lokalizace 5a-reduktázy v lidské kůži. Journal of Investigative Dermatology, 102: 221-226.
20. Eicheler W, Dreher M, Hoffmann R, Happle R & Aumüller G (1995). Imunohistochemický důkaz rozdílné distribuce izoenzymů 5a-reduktázy v lidské kůži. British Journal of Dermatology, 133: 371-376.
21. Chen W, Zouboulis CC, Fritsch M, Blume-Peytavi U, Kodelja V, Goerdt S, Luu-The V & Orfanos CE (1998). Důkaz heterogenity a kvantitativních rozdílů exprese 5a-reduktázy typu 1 v kultivovaných lidských kožních buňkách: důkaz její přítomnosti v melanocytech. Journal of Investigative Dermatology, 110: 84-89.
22. Bayne EK, Flanagan J, Einstein M a další (1999). Imunohistochemická lokalizace 5a-reduktázy typu 1 a 2 v lidské pokožce hlavy. British Journal of Dermatology, 141: 481-491.
23. Sawaya ME & Price VH (1997). Rozdílné hladiny 5a-reduktázy typu I a II, aromatázy a androgenního receptoru ve vlasových folikulech žen a mužů s androgenní alopecií. Journal of Investigative Dermatology, 109: 296-300.
24. Courchay G, Boyera N, Bernard BA & Mahe Y (1996). Messenger RNA exprese podtypů enzymů steroidogeneze v lidské pilosebaceózní jednotce. Skin Pharmacology, 9: 169-176.
25. Adams J, Franks S, Polson DW, Mason HD, Abdulwahid N, Tucker M, Morris DV, Price J & Jacobs HC (1985). Multifolikulární ovaria: klinické a endokrinní rysy a odpověď na pulzní gonadotropin uvolňující hormon. Lancet, 2: 1375-1379.
26. Herter LD, Magalhães JA & Spritzer PM (1996). Význam stanovení objemu vaječníků u dospívajících dívek s poruchami menstruace. Journal of Clinical Ultrasound, 24: 243-248.
27. Spritzer PM, Oppermann-Lisboa K, Mattiello S & Lhullier F (2000). Použití spironolaktonu jako jediného přípravku pro dlouhodobou léčbu pacientů s hirzutizací. Clinical Endocrinology, 52: 587-594.
28. Spritzer PM, Billaud L, Thalabard J, Kuttenn F & Mauvais-Jarvis P (1990). Léčba cyproteron acetátem versus hydrokortizonem u pozdní hyperplazie nadledvin. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 70: 642-645.
29. Azziz R, Dewailly D & Owerbach D (1994). Neklasická hyperplazie nadledvin: současné koncepty. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 78: 810-815.
30. Ferriman D & Gallwey JD (1961). Clinical assessment of body hair growth in women [Klinické hodnocení růstu ochlupení u žen]. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 21: 1140-1148.
31. Reis FM, Maia AL, Ribeiro MFM & Spritzer PM (1999). Progestinová modulace exprese genů c-fos a prolaktinu v lidském endometriu. Fertility and Sterility, 71: 1125-1132.
32. Taplin ME, Bubley GJ, Shuster TD, Frantz ME, Spooner AE, Ogata GK, Keer HN & Balk SP (1995). Mutace genu pro androgenní receptor u metastazujícího karcinomu prostaty nezávislého na androgenech. New England Journal of Medicine, 332: 1393-1398.
33. Eicheler W, Huth A, Happle R & Hoffmann R (1996). RNA-hladiny 5a-reduktázy a androgenního receptoru v lidské kůži, vlasových folikulech a buňkách odvozených od folikulů. In: Van Neste DJJ & Randall VA (Editors), Hair Research for the Next Millenium. Elsevier Science, Amsterdam, 327-331.
34. Schweikert HU & Wilson JD (1974). Regulace růstu lidských vlasů steroidními hormony. I. Metabolismus testosteronu v izolovaných vlasech. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 38: 811-819.
35. Kaufman KD, Olsen EA, Whiting D et al. (1998). Finasterid v léčbě mužů s androgenní alopecií. Finasteride Male Pattern Hair Loss Study Group. Journal of the American Academy of Dermatology, 39: 578-589.
36. Tartagni M, Schonauer LM, De Salvia MA, Cicinelli E, De Pergola G & D’Addario V (2000). Srovnání přípravků Diane 35 a Diane 35 plus finasterid v léčbě hirsutismu. Fertility and Sterility, 73: 718-723.
37. Sahin Y, Diller S & Kelestimur F (2001). Srovnání přípravků Diane 35 a Diane 35 plus finasterid v léčbě hirsutismu. Fertility and Sterility, 75: 496-500.
38. Rittmaster RS (1994). Finasterid. New England Journal of Medicine, 330: 120-125.
39. Asada Y, Sonoda T, Ojiro M, Kurata S, Sato T, Ezaki T & Takayasu S (2001). 5a-Reduktáza typu 2 je konstitutivně exprimována v dermální papile a pouzdře pojivové tkáně vlasového folikulu in vivo, ale ne během kultivace in vitro. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86: 2875-2880.
40. Eicheler W, Happle R & Hoffmann R (1998). Aktivita 5a-reduktázy v lidském vlasovém folikulu se koncentruje v dermální papile. Archives of Dermatological Research, 290: 126-132.