Isolation of Malassezia furfur from a Cat

Rod Malasseziacenese skládá z lipofilních kvasinek, které jsou známé jako součást mikroflóry lidské kůže a mnoha savců a ptáků a jsou zřídka izolovány z životního prostředí (11). Tyto kvasinky mají typickou fyziologickou vlastnost využívat lipidy jako zdroj uhlíku. S výjimkou Malassezia pachydermatis vyžadují ostatní druhy rodu Malassezia pro svůj růst in vitro doplňování mastných kyselin s dlouhým řetězcem (C12 až C24). Taxonomie těchto kvasinek byla vždy předmětem sporů (8). Před několika lety byly akceptovány druhyM. furfur (Robin) Baillon 1889 a M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Nedávno byl rod revidován na základě molekulárních dat a požadavků na lipidy a byl rozšířen na sedm druhů: M. furfur,M. pachydermatis, M. sympodialis,M. globosa, M. obtusa, M. restricta a M. slooffiae (4).

M. furfur je známý oportunní kožní patogen člověka. Je původcem pityriasis versicolor, pityriasis capitis, seboroické dermatitidy a folikulitidy. Nicméně význam druhu Malassezia jako emergentního patogenu roste, protože bylo popsáno, že způsobuje systémové infekce u imunokompromitovaných pacientů a u novorozenců, kteří dostávají intravenózně lipidy (1, 12). Cílem tohoto průzkumu bylo studovat lipofilní mikrobiotu zevních zvukovodů koček bez otitis externa. V této práci je popsána první izolace M. furfur z kočky.

Zevní zvukovody 33 domácích koček (17 kocourů a 16 koček) bez otitis externa byly vzorkovány pomocí tamponu. Vzorky byly kultivovány na Sabouraudově glukózovém agaru (SGA; Biolife s.r.l., Milán, Itálie), SGA doplněném olivovým olejem (10 ml/litr) a Leemingově médiu (10 g peptonu, 5 g glukózy, 0,1 g kvasnicového extraktu, 4 g sušené volské žluči, 1 ml glycerolu, 0,5 g glycerolmonostearátu, 0,5 ml Tween 60, 10 ml plnotučného kravského mléka, 12 g agaru na litr, pH 6,2) (9). Všechna média obsahovala 0,05 % chloramfenikolu a 0,05 % cykloheximidu. Každý stěr cerumenu byl tepelně fixován, obarven Diff-Quickem a mikroskopicky vyšetřen na přítomnost typických buněkMalassezia. Destičky byly inkubovány při 35 °C a vyšetřeny po 3, 5 a 7 dnech. Když byl zjištěn růst, bylo vybráno pět různých kolonií ze SGA doplněného olivovým olejem a z Leemingova média a subkultivováno na SGA, aby se určila jejich závislost na lipidech. M. pachydermatis byl identifikován podle mikroskopické morfologie a podle schopnosti růst na SGA. Identifikace kvasinek závislých na lipidech byla založena na Tweenově difuzním testu navrženém Guillotem et al. (7), asimilačním testu Cremophor EL a štěpení eskulinu popsaném Mayserem et al. (10) a jako kontroly byly použity následující typové kmeny: M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (kde NT znamená neotyp), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T a M. obtusa CBS 7876T (laskavě poskytnuté E. Guého a J. Guillotem). Difuzní test Tween umožňuje rozlišit druhy závislé na lipidech podle jejich schopnosti asimilovat různé polyoxyethylen sorbitanové estery (Tweens 20, 40, 60 a 80). Kremofor EL obsahuje ricinový olej a kyselinu ricinolovou a používá se jako další klíčový znak pro rozlišení druhů M. furfur, M. slooffiae a M. sympodialis.

Typické buňky Malassezia byly patrné v Diff-Quickem barvených nátěrech cerumenu ze sedmi koček, ale pouze pět z těchto vzorků bylo pozitivních kultivačně. Druhy Malassezia byly izolovány od sedmi koček (21,2 %), ale ve dvou Diff-Quick-barevných stěrech z těchto koček nebyly typické buňky Malassezia zjištěny. Kvasinky patřící k jiným druhům nebyly izolovány. U šesti koček (18,1 %) byla během prvního týdne inkubace izolována pouze M. pachydermatis (tři izoláty rostly po 3 dnech, dva po 5 dnech a jeden po 7 dnech). Z jedné kočky byl v 7 dnech inkubace izolován pouze druh závislý na lipidech. Tento izolát tvořil na modifikovaném Dixonově agaru (36 g sladového extraktu, 6 g peptonu, 20 g vysušené volské žluči, 10 ml Tween 40, 2 ml glycerolu, 2 ml kyseliny olejové, 12 g agaru na litr, pH 6,0) po 7 dnech inkubace při 32 °C krémové, hladké a umbonátové kolonie o průměrném průměru 4,3 mm (4). Struktura byla drobivá a buňky byly vejčité až kulovité (1,5 až 3,0 μm na 1,5 až 4 μm). Na široké bázi se tvořily pupeny a v některých buňkách byla patrná krátká vlákna. Katalázová reakce byla pozitivní. Tento izolát využíval čtyři Tweeny (20, 40, 60 a 80), asimiloval Cremophor EL a byl slabě pozitivní na štěpení eskulinu, stejně jako typové kmeny M. furfur CBS 1878T aM. furfur CBS 7019NT (obr. 1). Podle těchto nálezů byla tato na lipidech závislá kvasinka identifikována jako M. furfur(7, 10).