… bifida (SB) je nejčastější vrozená vada způsobující postižení v Severní Americe, s četností , 3-4 na každých 10 000 živě narozených dětí. Nejčastější a nejzávažnější formou je myelomeningokéla (MM), která představuje více než 90 % všech případů SB. MM je míšní léze charakterizovaná otvorem v páteři, kterým vystupují meningy a nervové tkáně. Ke klinickým důsledkům míšní léze patří potíže s pohybem, citlivostí, inkontinencí a problémy s učením . Deficit pozornosti u jedinců s MM byl zjištěn prostřednictvím hodnocení poruchy pozornosti s hyperaktivitou (ADHD). Děti s MM častěji než kontrolní skupiny vykazují klinicky významné zvýšení hodnocení ADHD (31 % u MM oproti 7 % v běžné populaci) . Pozoruhodné je, že 74,5 % jedinců s MM s významným zvýšením hodnocení ADHD odpovídalo převážně nepozornému podtypu ADHD . Nezávislá studie Ammermana a kol. ukázala podobné výsledky . Kyselina listová je vitamín skupiny B důležitý i ve vztahu k MM. Studie ukazují, že suplementace kyselinou listovou snižuje výskyt i recidivu defektů neurální trubice o 72 % v sedmi zemích . Takové údaje vedly k doporučení veřejného zdravotnictví doplňovat kyselinu listovou perikoncepčně a v roce 1998 k obohacení všech obilných výrobků ve Spojených státech kyselinou listovou . Kyselina listová má zásadní význam pro buněčné procesy včetně syntézy nukleotidů a metylace. Enzym 5,10-methylenetrahy- drofolát reduktáza (MTHFR) funguje v dráze, která přeměňuje folát na metabolity, jež mohou být využity pro buněčné procesy včetně methylace genových promotorů a proteinů, syntézy RNA, DNA, aminokyselin a fosfolipidů (viz obrázek 1 ). Například se předpokládá, že dopaminem stimulovaná metylace fosfolipidů (PLM) je důležitým mechanismem pro modulaci vypalování neuronů a narušená metylační aktivita může přispívat k poruchám pozornosti . Neuroblastomové buňky (SH-SY5Y) ošetřené 5-formylTHF způsobily zvýšenou metylaci dopaminového receptoru D4 (DRD4) pomocí proteinové metyltransferázy a S-adenosylmethioninu, což vedlo k od dávky závislému zvýšení bazální i dopaminem stimulované PLM . DRD4 je jedním z nejvíce replikovaných genů, u nichž byla zjištěna souvislost s ADHD . Genetické varianty v MTHFR byly spojeny s MM . Dvě nejčastěji studované varianty jsou C677T (rs1801133) a A1298C (rs1801131). Přítomnost kterékoli z těchto variant v homozygotním stavu zvyšuje pravděpodobnost postižení SB na 1,5 až 2,4násobek oproti běžné populaci, ačkoli údaje pro variantu 1298C jsou rozporuplné . Několik studií spojuje hladiny folátů/homocysteinu s kognitivními funkcemi. Například pacienti s nedostatkem folátů v centrálním nervovém systému vykazují kognitivní deficity . Morris et al. prokázali, že ve srovnání s kontrolami mají jedinci s nízkým obsahem folátů významně snížené paměťové funkce . Jiné studie ukazují podobné výsledky; to znamená, že kognitivní funkce se zlepšují s vyšší hladinou folátů a snižují s vyšší hladinou homocysteinu. MTHFR je klíčovým regulátorem hladiny folátu oproti homocysteinu . V této studii jsme testovali, zda genetická variabilita enzymu metabolismu folátů MTHFR souvisí s projevy behaviorálního fenotypu ADHD u dětí s MM. Účastníci této studie byli rozšířenou populací oproti populaci použité v práci Burmeister et al . Vzorek genotypizovaný na SNP v genu MTHFR tvořilo 262 jedinců s MM. Padesát procent těchto jedinců tvořili běloši a 50 % hispánci. Vzorek se skládal z 53 % žen a 47 % mužů a medián věku byl 12,4 roku. U dalších pacientů, u nichž nebyla k dispozici DNA, byly rovněž vyplněny škály hodnocení ADHD rodiči. Tito pacienti byli použiti k porovnání četnosti pozitivních výsledků testů ADHD u jedinců s MM oproti pozitivním testům ADHD u kontrol. Pro toto srovnání byly velikosti skupin následující: vzorek MM tvořilo 478 pacientů a kontrolní vzorek tvořilo 196 kontrolních jedinců nepostižených MM. Etnická příslušnost jedinců s MM a kontrolních jedinců bez MM je uvedena v tabulce 1 . Oba vzorky tvořilo přibližně 50 % mužů a 50 % žen s mediánem věku 13,06 let u pacientů s MM a mediánem věku 12,73 let u kontrolní skupiny. Tyto experimenty byly provedeny s porozuměním a písemným souhlasem každého subjektu při dodržení etického kodexu Světové lékařské asociace. Studie byla schválena Institutional Review Board Texaské univerzity v Houstonu pod číslem schválení HSC-MS- 00-0001 a The Hospital for Sick Children Research Ethics Board pod číslem schválení 1000006149. Rodiče každého účastníka vyplnili hodnotící škálu Swanson Nolan Achenbach Pelham-IV (SNAP-IV; www.adhd.net) k posouzení stavu ADHD. Škála SNAP-IV se skládá z 18 položek, z nichž 9 představuje chování spojené s nepozorností a 9 s hyperaktivitou-impulzivitou. Je navržena tak, aby odpovídala kritériím Diagnostického a statistického manuálu-IV (DSM-IV), který je obecně přijímán jako zlatý standard pro diagnostiku ADHD. Rodiče hodnotili chování svého dítěte na čtyřbodové škále od nuly (vůbec ne) do tří (velmi), jak bylo popsáno dříve . Účastníci, kteří splňovali klinicky definované hraniční hodnoty představující horních 5 % populace na škále nepozornosti, byli označeni jako “ADHD – převážně nepozorný typ“; ti, kteří měli zvýšení pouze v horních 5 % na škále hyperaktivity-impulzivity, představovali “hyperaktivní-impulzivní typ“. Zvýšení na obou stupnicích představovalo „kombinovaný typ ADHD“. SNAP-IV je spolehlivé rodičovské hodnocení chování s ADHD s dobrou shodou se strukturovanými rozhovory , široce používané k hodnocení ADHD v klinických studiích a v mnoha výzkumných studiích v USA i ve světě. Výběr SNP, genotypizace a statistická analýza byly provedeny podle předchozího popisu . Stručně řečeno, SNP byly vybrány v rámci referenčního genu MTHFR (NM_005957) z databáze Genome Browser dbSNP Build132 Kalifornské univerzity v Santa Cruz (UCSC) a také z veřejné verze HapMap3 č. 27 . SNP byly pro genotypizaci prioritizovány na základě potenciální funkce (např. pokud varianta mění aminokyselinu), umístění genu a frekvence minoritní alely vyšší než 0,05. Bylo vybráno celkem 7 SNP v genu MTHFR (přibližné umístění viz obrázek 2): rs3737965, rs2066470, rs9651118, rs1801133 (známý také jako 677C . T), rs1801131 (známý také jako 1298A . C, rs2274976 a rs4846049. Pro analýzu byla odebrána DNA od pacientů s MM. Genotypizace byla provedena pomocí …
.