Biologi I Laboratoriemanual

Ting, som du skal kunne forklare for andre efter denne opgave:

• Sammensætning
• Total forstørrelse
• Binokulær
• Synsfelt
• Fokusdybde
• Inversionsfænomenet

Slideshow

Baggrund

Mange organismer (bakterier) og dele af organismer (celler), som biologer studerer, er for små til at blive set med det menneskelige øje. Vi bruger mikroskoper til at forstørre eksemplarer til vores undersøgelser. Ordet mikroskop betyder “at se småt”, og det første primitive mikroskop blev skabt i 1595.

Der findes flere typer af mikroskoper, men du vil for det meste bruge et sammensat lysmikroskop. Denne type mikroskop bruger synligt lys fokuseret gennem to linser, okularet og objektivet, til at se en lille prøve. Kun celler, der er tynde nok til, at lyset kan passere igennem, vil være synlige med et lysmikroskop i et todimensionelt billede.

Et andet mikroskop, som du vil bruge i laboratoriet, er et stereoskopisk mikroskop eller et dissektionsmikroskop. Denne type mikroskop bruger synligt lys til at se tykkere, større eksemplarer, som f.eks. et insekt, i 3D. Da du ser større prøver, er dissektionsmikroskopets forstørrelsesområde lavere end det sammensatte lysmikroskop.

Din instruktør vil gennemgå delene og funktionerne af de sammensatte lysmikroskoper, som vi skal bruge i løbet af semestret. Udfyld tabellen på næste side for at hjælpe dig med at huske disse vigtige oplysninger. Du vil sandsynligvis vende tilbage til denne side ofte. Her er et billede af et lysmikroskop, som du kan mærke og tage noter på.

Del af mikroskop	Funktion
Okularer (okularer)
Arm
Revolverende næseparti
Stage
Objektiver
Glideklips
Stagekontrolknap
Kondenser
Iris-membran
Substage-lampe (Illuminator)
Grovindstilling
Finjustering
Fin justering
Base

Regler og instruktioner for brug af de sammensatte lysmikroskoper

Din lærer vil drøfte brugen af mikroskopet med din klasse. De korrekte trin, der skal følges for korrekt fokusering, vil blive gennemgået. Du skal følge den trinvise rækkefølge, som din instruktør angiver. Selv om du er fortrolig med denne type mikroskop, forventes det stadig, at du gennemgår gennemgangen af fokuseringen sammen med resten af klassen.

1. Vigtige generelle regler:
   1. Bær altid mikroskopet med 2 hænder – læg den ene hånd på mikroskoparmen og den anden hånd under mikroskopfoden.
   2. Rør ikke objektivlinserne (dvs. spidserne på objektiverne).
   3. Hold objektiverne i scanningspositionen, og hold scenen lav, når du tilføjer eller fjerner objektglas.
   4. Se altid på mikroskopet fra siden, når du foretager store ændringer i højden af scenen.
   5. Objektivlinserne må kun rengøres med specielt linsepapir og linse-rengøringsvæske.
   6. Leg IKKE håndværker – mikroskopet må ikke skilles ad. Rapporter funktionsfejl til din instruktør.
2. Sådan henter du et mikroskop fra laboratorieskabet:
   1. Først skal du rydde et område på bordet til mikroskopet – undgå et overfyldt arbejdsområde.
   2. Mikroskoperne er nummereret i henhold til, hvor du sidder. Find nummeret under din bænk, og brug det tilsvarende mikroskop.
   3. Bær mikroskopet med TO hænder.
   4. Sikr elkablet – lad det ikke hænge ned fra bordet!
3. Når du returnerer mikroskopet til laboratorieskabet:
   1. Sænk scenen.
   2. Rotér scanningsobjektivet i position over scenen.
   3. Fjern objektglasset fra scenen.
   4. Rengør objektglasset og objektivet med den medfølgende specielle linse-rengøringsvæske og papir.
   5. Centrer scenen, så den ikke rager for langt ud til begge sider.
   6. Sikr ledningen ved at vikle den ind under mikroskopets scene..
   7. Sæt støvdækslet på igen.
   8. Bær mikroskopet med TO hænder.
   9. Sæt mikroskopet tilbage i samme bås, som du fik det fra, idet du sørger for at sætte det i arm ud.
4. Sådan fokuserer du mikroskopet:
   Se på mikroskopet fra siden:
   1. Sænk scenen så langt, som den kan komme.
      1. Drejse objektiverne, så scanningsobjektivet peger nedad mod scenen.
      2. Juster scenen, så aperturen (åbningen i midten af scenen) er centreret.
      3. Placér objektglasset på scenen, og brug scenklemmen til at fastgøre det. Stativklemmen bevæger sig kun inden for det vandrette plan af bordet, og den fastgør objektglasset ved kun lige akkurat at berøre det nederste højre hjørne af objektglasset.
      4. Center prøven på dit objektglas under objektivet ved at flytte bordet.
      5. Flyt bordet næsten så langt op, som det kan komme, og pas på, at objektglasset ikke rører objektivlinsen – se fra siden, så du kan se, hvor højt du skal hæve bordet.
   2. Se gennem okulæret:
      1. Brug grovjusteringsknappen til at flytte scenen nedad, indtil prøven kommer i fokus, og skærp derefter fokus.
      2. Center prøven i mikroskopets felt ved at flytte scenen.
   3. Se på mikroskopet fra siden:
      1. Drej langsomt objektivet med lav effekt (10X) i position.
   4. Se gennem okulæret:
      1. Skærp fokus om nødvendigt med grovjusteringsknappen. Der er normalt kun en minimal justering nødvendig.
      2. Center prøven i feltet, hvis det er nødvendigt.
   5. Se på mikroskopet fra siden:
      1. Rotér det kraftige objektiv meget forsigtigt på plads!
   6. Se gennem okularerne:
      1. Skærp fokus ved hjælp af finjusteringsknappen alene. Re-centrer om nødvendigt. (Hvis prøven er “forsvundet”, skal du straks vende tilbage til lav effekt og centrere prøven igen.)
      2. Når du fjerner et objektglas, skal du altid bringe objektiverne tilbage til scanningspositionen og sænke bordet, før du løfter objektglasset af!

Del 1: Samlet forstørrelse

Forstørrelse er forholdet mellem billedstørrelsen med mikroskopet og den faktiske størrelse af objektet. Når man siger, at forstørrelsen er 10, er det billede, man ser ved hjælp af mikroskopet, ti gange større end ved at betragte objektet med det blotte øje. Husk, at med et sammensat lysmikroskop forstørrer du med to linser, så for at beregne den samlede forstørrelse skal du gange den objektive forstørrelse med den okulære forstørrelse. Se på mikroskopet og brug nedenstående skema til at beregne den samlede forstørrelse for hvert objektiv:

	Objektivobjektiv	Okularobjektiv	= Samlet forstørrelse
Scan objektiv
Lavt objektiv
Højt objektiv

Del 2: Inversionsfænomenet

Få et dias med bogstavet “e” til rådighed i klasseværelset. Betragt objektglasset med øjnene, og placer det derefter på mikroskopet. Brug fokuseringssekvensen til at se objektglasset under svag effekt.

Procedure

1. Tegn bogstavet “e”, som det ser ud, når du ser på objektglasset uden mikroskop.
2. Tegn bogstavet “e”, som det ser ud, når du ser på objektglasset under mikroskopet.
3. Bevæg objektglasset til højre ved hjælp af det mekaniske stagehåndtag, mens du ser gennem okulæret. Hvilken vej bevæger “e” sig?
4. Bevæg dit objektglas væk fra dig ved hjælp af den mekaniske stagehåndtag, mens du ser gennem okulæret. Hvilken vej bevæger “e” sig?

Oplys inversionsfænomenet med dine egne ord.

Del 3: Synsfeltet

Synsfeltet er den del af prøven, som du ser, når du ser gennem objektiverne. Synsfeltet aftager ved højere forstørrelser.

Procedure

Placér en blå plastiklineal hen over stageåbningen, så linealens kant er synlig som en lodret linje langs feltdiameteren. Estimer feltstørrelsen i millimeter for hvert af objektivobjektiverne.

Scan __________ Lav (10X) __________ Høj (40X) __________

Del 4: Fokusdybde

Fokusdybden er den tykkelse af prøven, der forbliver i fokus ved en given forstørrelse. Fokusdybden aftager ved højere forstørrelser.

Procedure

Få et farvet trådudsnit, og betragt det under scanning eller lav styrke. Bestem derefter, hvilken farvetråd der er:

• Overst
• I midten
• Underst

Hinvis: Ved hjælp af instruktionerne til fokusering skal du fokusere på det område, hvor de tre tråde krydser hinanden. Brug den fine fokusering til at skelne rækkefølgen af trådene.

Del 5: Fremstilling af en vådmontering

I løbet af semestret forventes det, at du med succes skal lave en række enkle præparationer af objektglas kaldet “vådmontering”. Det eksemplar, der skal observeres, anbringes på et rent objektglas, der tilsættes en dråbe eller to vand, og et dækglas anbringes omhyggeligt over vandet og eksemplaret. Din instruktør vil demonstrere denne teknik.

Før en vådmontering af bassinvand ved at følge nedenstående fremgangsmåde:

1. Placér en dråbe bassinvand på et rent objektglas ved hjælp af en engangspipette af plast.
2. Dæk bassinvandet på objektglasset med et dækglas. Prøv at placere dækglasset på skråt for at undgå luftbobler.
3. Tør overskydende væske af på objektglasset.
4. Sæt objektglasset på mikroskopet for at observere prøven.
   1. Start på scanningsobjektivet
   2. Skift forsigtigt til det lave og høje objektiv efter behov.

Håber du vil se nogle levende organismer i dit bassinvand. Hvis du ser grønt materiale, er det sandsynligvis en slags plante. Kig for at se, om der er noget, der bevæger sig. Beskriv i feltet nedenfor, hvad du observerer under mikroskopet, og tegn et simpelt billede.

Del 6: Stereoskopisk dissektionsmikroskop

Din instruktør vil demonstrere korrekt brug af dissektionsmikroskopet. Disse mikroskoper giver generelt en lavere forstørrelse end det sammensatte mikroskop, du bruger.

Procedure

Se de eksemplarer, der er tilgængelige på laboratoriebordet, ved hjælp af dissektionsmikroskopet. Læg mærke til, at mikroskopet har to lyskilder, en fra bunden og en fra oven. Prøverne er ikke altid monteret på et objektglas. Bemærk også, at når du ser genstande under dissektionsmikroskopet, er de tredimensionelle.

Rengøring og pleje af mikroskopet

1. Beskriv, hvordan og med hvad du skal rengøre linsen på mikroskopet.
2. Oplys fire ting, som du skal gøre, når du er færdig med at bruge mikroskopet ved afslutningen af laboratoriet.