Isolering af Malassezia furfur fra en kat

Slægten Malasseziaconsisterer af lipofile gærsvampe, som er kendt for at være bestanddele af mikrofloraen i menneskers hud og mange pattedyr og fugle, og som sjældent isoleres fra miljøet (11). Disse gærsvampe har den typiske fysiologiske egenskab, at de bruger lipider som kulstofkilde. Bortset fra Malassezia pachydermatis kræver de resterende arter af Malassezia-slægten tilskud af langkædede (C12 til C24) fedtsyrer for at kunne vokse in vitro. Taxonomien af disse gærsvampe har altid været genstand for kontroverser (8). For få år siden var de arter, der blev accepteret, M. furfur (Robin) Baillon 1889 og M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. For nylig er slægten blevet revideret på grundlag af molekylære data og lipidkrav og er blevet udvidet til at omfatte syv arter: M. furfur,M. pachydermatis, M. sympodialis,M. globosa, M. obtusa, M. restricta og M. slooffiae (4).

M. furfur er en kendt opportunistisk kutan patogen hos mennesker. Den er årsag til pityriasis versicolor, pityriasis capitis, seborrheisk dermatitis og folliculitis. Ikke desto mindre er Malassezia-arter ved at få større og større betydning som en nyopstået patogen, fordi det er blevet beskrevet, at de kan forårsage systemiske infektioner hos immunsvækkede patienter og hos nyfødte, der får intravenøse lipider (1, 12). Formålet med denne undersøgelse var at undersøge den lipofile mikrobiota i de ydre ørekanaler hos katte uden otitis externa. I denne artikel beskrives den første isolering af M. furfur fra en kat.

De ydre øregangene hos 33 huskatte (17 hankatte og 16 hunkatte) uden otitis externa blev prøvetaget ved hjælp af en vatpind. Prøverne blev dyrket på Sabouraud glucose agar (SGA; Biolife s.r.l., Milano, Italien), SGA suppleret med olivenolie (10 ml/liter) og Leemings medium (10 g pepton, 5 g glukose, 0,1 g gærekstrakt, 4 g tørret oksegalde, 1 ml glycerol, 0,5 g glycerolmonostearat, 0,5 ml Tween 60, 10 ml fuldfed komælk, 12 g agar pr. liter, pH 6,2) (9). Alle medier indeholdt 0,05 % chloramphenicol og 0,05 % cycloheximid. Hvert udstryg af cerumen blev varmefikseret, farvet med Diff-Quick og undersøgt mikroskopisk for tilstedeværelsen af typiske Malassezia-celler. Pladerne blev inkuberet ved 35 °C og undersøgt efter 3, 5, 7 og 14 dage. Når der blev konstateret vækst, blev der udvalgt fem forskellige kolonier fra SGA suppleret med olivenolie og fra Leemings medium og subkultiveret på SGA for at bestemme deres lipidafhængighed. M. pachydermatis blev identificeret ved hjælp af mikroskopisk morfologi og ved evnen til at vokse på SGA. Identifikationen af de lipidafhængige gærsvampe blev baseret på Tween-diffusionstesten foreslået af Guillot et al. (7), Cremophor EL-assimilationstesten og spaltning af esculin beskrevet af Mayser et al. (10), og følgende typestammer blev anvendt som kontrol: M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (hvor NT står for neotype), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T, og M. obtusa CBS 7876T (venligst stillet til rådighed af E. Guého og J. Guillot). Tween-diffusionstesten gør det muligt at skelne mellem lipidafhængige arter ud fra deres evne til at assimilere forskellige polyoxyethylensorbitanestere (Tweens 20, 40, 60 og 80). Cremophor EL indeholder ricinusolie og ricinolsyre og anvendes som en yderligere nøglekarakter til differentiering af arterne M. furfur, M. slooffiae og M. sympodialis.

Typiske Malassezia-celler var tydelige i Diff-Quick-farvede udstrygninger af cerumen fra syv katte, men kun fem af disse prøver var positive ved dyrkning. Malassezia-arter blev isoleret fra syv katte (21,2 %), men i to Diff-Quick-farvede udstrygninger fra disse katte blev der ikke påvist de typiske Malassezia-celler. Gær, der tilhører andre arter, blev ikke isoleret. Hos seks katte (18,1 %) blev kun M. pachydermatis isoleret i løbet af den første uges inkubationstid (tre isolater blev dyrket efter 3 dage, to efter 5 dage og et efter 7 dage). Kun en lipidafhængig art blev isoleret fra en kat efter 7 dages inkubation. Dette isolat dannede cremefarvede, glatte og umbonate kolonier med en gennemsnitlig diameter på 4,3 mm på modificeret Dixon agar (36 g maltekstrakt, 6 g pepton, 20 g tørret oksegalde, 10 ml Tween 40, 2 ml glycerol, 2 ml oliesyre, 12 g agar pr. liter, pH 6,0) (4) efter 7 dages inkubation ved 32 °C. Teksturen var sprød, og cellerne var ægformede til kugleformede (1,5-3,0 μm gange 1,5-4 μm). Der blev dannet knopper på en bred base, og der blev set korte filamenter i nogle celler. Katalasereaktionen var positiv. Dette isolat udnyttede de fire Tweens (20, 40, 60 og 80), assimilerede Cremophor EL og var svagt positiv for esculinsplitning, ligesom typestammerne M. furfur CBS 1878T og M. furfur CBS 7019NT (Fig.1). I henhold til disse fund blev denne lipidafhængige gær identificeret som M. furfur(7, 10).