Isolierung von Malassezia furfur aus einer Katze

Die Gattung Malassezia besteht aus lipophilen Hefen, die als Bestandteile der Mikroflora der menschlichen Haut und vieler Säugetiere und Vögel bekannt sind und selten aus der Umwelt isoliert werden (11). Diese Hefen haben die typische physiologische Eigenschaft, Lipide als Kohlenstoffquelle zu nutzen. Mit Ausnahme von Malassezia pachydermatis benötigen die übrigen Arten der Gattung Malassezia für ihr In-vitro-Wachstum eine Ergänzung mit langkettigen (C12- bis C24-) Fettsäuren. Die Taxonomie dieser Hefen ist seit jeher umstritten (8). Noch vor einigen Jahren wurden die Arten M. furfur (Robin) Baillon 1889 und M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935 akzeptiert. Kürzlich wurde die Gattung auf der Grundlage molekularer Daten und der Anforderungen an die Lipide überarbeitet und auf sieben Arten ausgeweitet: M. furfur, M. pachydermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta und M. slooffiae (4).

M. furfur ist ein bekannter opportunistischer Hauterreger des Menschen. Er ist der Erreger von Pityriasis versicolor, Pityriasis capitis, seborrhoischer Dermatitis und Follikulitis. Malassezia-Spezies gewinnen jedoch zunehmend an Bedeutung, da sie bei immungeschwächten Patienten und bei Neugeborenen, die intravenöse Lipide erhalten, systemische Infektionen verursachen können (1, 12). Ziel dieser Studie war es, die lipophile Mikrobiota der äußeren Gehörgänge von Katzen ohne Otitis externa zu untersuchen. In dieser Arbeit wird die erste Isolierung von M. furfur aus einer Katze beschrieben.

Die äußeren Gehörgänge von 33 Hauskatzen (17 männliche und 16 weibliche) ohne Otitis externa wurden mit einem Tupfer beprobt. Die Proben wurden auf Sabouraud-Glukose-Agar (SGA; Biolife s.r.l., Mailand, Italien), SGA mit Zusatz von Olivenöl (10 ml/Liter) und Leeming-Medium (10 g Pepton, 5 g Glukose, 0,1 g Hefeextrakt, 4 g getrocknete Rindergalle, 1 ml Glycerin, 0,5 g Glycerinmonostearat, 0,5 ml Tween 60, 10 ml Vollfett-Kuhmilch, 12 g Agar pro Liter, pH-Wert 6,2) (9). Alle Medien enthielten 0,05 % Chloramphenicol und 0,05 % Cycloheximid. Jeder Ausstrich von Cerumen wurde hitzefixiert, mit Diff-Quick gefärbt und mikroskopisch auf das Vorhandensein typischer Malassezia-Zellen untersucht. Die Platten wurden bei 35°C bebrütet und nach 3, 5, 7 und 14 Tagen untersucht. Wurde Wachstum festgestellt, wurden fünf verschiedene Kolonien aus dem mit Olivenöl ergänzten SGA und aus dem Leeming-Medium ausgewählt und auf SGA subkultiviert, um ihre Lipidabhängigkeit zu bestimmen. M. pachydermatis wurde durch mikroskopische Morphologie und durch die Fähigkeit, auf SGA zu wachsen, identifiziert. Die Identifizierung der lipidabhängigen Hefen erfolgte anhand des von Guillot et al. (7) vorgeschlagenen Tween-Diffusionstests, des Cremophor-EL-Assimilationstests und der von Mayser et al. (10) beschriebenen Aufspaltung von Esculin, wobei die folgenden Typstämme als Kontrollen verwendet wurden: M. furfur CBS 1878T, M. furfur CBS 7019NT (wobei NT für Neotyp steht), M. sympodialis CBS 7222T, M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T und M. obtusa CBS 7876T (freundlicherweise zur Verfügung gestellt von E. Guého und J. Guillot). Der Tween-Diffusionstest ermöglicht die Unterscheidung zwischen lipidabhängigen Arten anhand ihrer Fähigkeit, verschiedene Polyoxyethylen-Sorbitan-Ester (Tweens 20, 40, 60 und 80) zu assimilieren. Cremophor EL enthält Rizinusöl und Ricinolsäure und wird als zusätzliches Schlüsselmerkmal zur Unterscheidung der Arten M. furfur, M. slooffiae und M. sympodialis verwendet.

Typische Malassezia-Zellen waren in Diff-Quick-gefärbten Ausstrichen von Cerumen von sieben Katzen zu sehen, aber nur fünf dieser Proben waren in der Kultur positiv. Malassezia-Spezies wurden von sieben Katzen (21,2 %) isoliert, aber in zwei Diff-Quick-gefärbten Abstrichen von diesen Katzen wurden die typischen Malassezia-Zellen nicht nachgewiesen. Hefen, die zu anderen Arten gehören, wurden nicht isoliert. Bei sechs Katzen (18,1 %) wurde in der ersten Woche der Inkubation nur M. pachydermatis isoliert (drei Isolate wurden nach 3 Tagen, zwei nach 5 Tagen und eines nach 7 Tagen angezüchtet). Nur eine lipidabhängige Spezies wurde von einer Katze nach 7 Tagen Bebrütung isoliert. Dieses Isolat bildete auf modifiziertem Dixon-Agar (36 g Malzextrakt, 6 g Pepton, 20 g getrocknete Rindergalle, 10 ml Tween 40, 2 ml Glycerin, 2 ml Ölsäure, 12 g Agar pro Liter, pH-Wert 6,0) (4) nach 7 Tagen Bebrütung bei 32 °C cremefarbene, glatte und schalenförmige Kolonien mit einem durchschnittlichen Durchmesser von 4,3 mm. Die Textur war brüchig, und die Zellen waren eiförmig bis kugelförmig (1,5 bis 3,0 μm mal 1,5 bis 4 μm). An einer breiten Basis wurden Knospen gebildet, und in einigen Zellen waren kurze Filamente zu sehen. Die Katalasereaktion war positiv. Dieses Isolat verwertete die vier Tweens (20, 40, 60 und 80), assimilierte Cremophor EL und war wie die Typstämme M. furfur CBS 1878T und M. furfur CBS 7019NT schwach positiv für die Esculinspaltung (Abb.1). Aufgrund dieser Befunde wurde diese lipidabhängige Hefe als M. furfur(7, 10) identifiziert.