Introduction
Les blocs de tissus inclus dans la paraffine font généralement référence aux spécimens de tissus inclus dans la paraffine fixée au formol (FFPE) qui ont été utilisés dans diverses applications thérapeutiques et dans la recherche depuis plusieurs décennies. Il s’agit d’une méthode utilisée pour préserver et préparer les échantillons biologiques qui seront utilisés dans la recherche expérimentale, les examens, les diagnostics et le développement thérapeutique. L’échantillon de tissu est d’abord préservé par fixation à l’aide de formol ou de formaldéhyde afin de garantir que les structures vitales et les protéines du tissu restent aussi proches que possible de l’état dans lequel elles se trouvaient lorsqu’elles faisaient encore partie de l’hôte. Après la fixation, il est noyé dans un bloc de cire de paraffine pour faciliter la section et le montage sur des lames microscopiques à des fins d’examen.
Processus
Les tissus sont d’abord prélevés sur des hôtes malades et normaux. Dans le cas des échantillons biologiques de cancer, l’oncologue compare souvent la tumeur primaire avec des échantillons qui sont obtenus à partir de sites métastatiques distants. Les tissus obtenus ne mesurent généralement que quelques centimètres selon la nature et la source et le tissu. Immédiatement après l’excision, le biospécimen est immergé dans du formol tamponné neutre à 10% pendant 18 à 24 heures pour durcir le tissu. Il est ensuite déshydraté et nettoyé à l’aide de concentrations croissantes d’éthanol. Il est ensuite enrobé dans de la paraffine de qualité immunohistochimique, spécifiquement utilisée pour enrober les tissus fixés au formol. L’un des facteurs les plus cruciaux est le temps de fixation, car les tissus fixés trop tôt peuvent être inutilisables pour les études de biologie moléculaire. La durée de la fixation doit être suffisamment longue pour assurer la préservation.
Une fois acquis, les échantillons sont manipulés avec soin pour maintenir la qualité. L’absence d’une manipulation appropriée peut conduire à l’exposition de caractéristiques inhabituelles qui peuvent affecter les résultats ou les déductions de la recherche. La méthode de préparation dépend généralement des exigences de l’équipe de recherche. Il peut s’agir de spécifications concernant l’objectif du tissu, sa taille ou sa coupe. Un bon exemple serait la coupe d’un muscle le long du « grain » des fibres musculaires ou en travers de celles-ci. Tout au long de la préparation des échantillons, un pathologiste médical certifié sera impliqué pour s’assurer que la procédure est effectuée avec précision et aussi pour l’évaluation de la qualité.
Une fois les échantillons terminés, ils sont stockés dans des banques de tissus. Les dossiers utiles tels que les informations démographiques et la date à laquelle le tissu a été collecté ou conservé doivent également être conservés car ils peuvent être utiles à l’équipe de recherche. D’autres informations critiques qui devraient être stockées comprennent les formulaires de consentement signés et les documents juridiques affiliés au biospécimen car ils peuvent avoir un impact sur l’utilisabilité du biospécimen dans la recherche et les essais cliniques.
Applications
Les blocs de tissus inclus dans la paraffine ont de nombreuses applications dans la recherche. Ces blocs de tissus sont souvent utilisés en immunohistochimie où les sections de tissus sont montées sur une lame. Ces sections sont ensuite baignées à l’aide d’une solution qui contient des anticorps qui se lient aux protéines et aux structures. Une coloration peut également être effectuée pour faciliter la visualisation des anticorps, ce qui montre l’emplacement des structures présentes dans l’échantillon. Ces informations peuvent être essentielles pour faciliter le diagnostic de maladies telles que la maladie d’Alzheimer ou le cancer. Les informations obtenues grâce à l’immunohistochimie sont également vitales pour de nombreux projets de lutte contre le cancer menés aujourd’hui dans les laboratoires. Certains des domaines thérapeutiques où les échantillons de tissus sont couramment utilisés sont :
-
Immunologie – les réponses du système immunitaire sont analysées à la fois dans l’état malade et dans l’état sain. L’étude des échantillons de tissus d’un patient atteint de la maladie auto-immune aide à déterminer la cause et le développement de la thérapie pour les personnes affectées.
-
Hématologie – les blocs de tissus inclus en paraffine sont essentiels dans l’étude de divers troubles sanguins et connexes. L’hématologie est un domaine crucial qui a contribué à la découverte de nombreux remèdes aux maladies liées au sang et à ses composants. Certaines études liées à ce domaine comprennent les études de la moelle osseuse qui peuvent inclure la génétique, la toxicologie et la régénération des tissus.
-
Oncologie – les blocs de tissus inclus en paraffine sont importants en oncologie car les tissus tumoraux préservés ont des morphologies caractéristiques qui ne sont pas présentes dans les autres tissus. Les équipes de recherche utilisent souvent ces échantillons pour rechercher des protéines qui peuvent aider au diagnostic et à l’évaluation de la maladie. Les tissus tumoraux fixés en formaldéhyde et inclus en paraffine (FFPE) doivent généralement avoir un contenu tumoral de 60%.
-
Comparatif – il existe également des blocs de tissus inclus en paraffine qui sont des tissus sains collectés auprès de donneurs sains. Ces tissus sont utilisés à des fins de comparaison et sont également importants pour la recherche et le développement.
Inconvénient
Dans les blocs de tissus inclus en paraffine, le processus de fixation nécessite généralement l’utilisation de formaline ou de formaldéhyde qui dénature les protéines qui sont dans l’échantillon de tissu. Cela peut rendre les protéines invisibles aux anticorps qui sont spécifiquement développés pour les détecter. Pour compenser, des techniques de récupération d’antigènes ont été développées pour récupérer spécifiquement les protéines, l’ADN et l’ARN de ces blocs de tissus. Cela permet d’ouvrir une vaste archive de matériel préservé et annoté pour des études de biochimie et de biologie moléculaire.
Conclusion
La qualité des blocs de tissus inclus en paraffine est cruciale pour les travaux utilisant ces échantillons comme source de protéines, d’ADN et d’ARN. En effet, même les tissus les mieux conservés contiendront des protéines inactives, de l’ADN et de l’ARN partiellement dégradés.