Immunoessais sur bandelettes
Points clés
- Simple à utiliser
- Les résultats peuvent être disponibles dans les 15 minutes
- Faible coût sans besoin d’équipement supplémentaire
- Stable et robuste en stockage
Alors que les méthodes rapides ont eu un impact majeur sur les tests microbiologiques, les méthodes d’équipement supplémentaire
Alors que les méthodes rapides ont eu un impact majeur sur les tests microbiologiques au cours des vingt dernières années environ, seule une poignée de développements peuvent prétendre avoir sorti les tests du laboratoire. L’un d’entre eux, qui est par conséquent largement utilisé, est le test immunologique à flux latéral, également connu sous le nom de test immunochromatographique ou test en bandelette. Comme beaucoup des meilleures idées, les tests immunologiques à flux latéral prennent une technologie intelligente et sophistiquée et la transforment en quelque chose de si simple à utiliser que presque tout le monde peut l’utiliser.
La technologie La technologie de base qui sous-tend les tests immunologiques à flux latéral a été décrite pour la première fois dans les années 1960, mais la première application commerciale a été le test de grossesse à domicile Clearview d’Unipath lancé en 1988. Depuis lors, la même technologie a été employée pour développer une gamme étendue et toujours plus grande de tests pour des applications cliniques, vétérinaires, agricoles, de l’industrie alimentaire, de la bio-défense et de l’environnement.
Les tests en bandelettes sont extrêmement polyvalents et sont disponibles pour une énorme gamme d’analytes, des protéines sanguines aux mycotoxines et des pathogènes viraux aux toxines bactériennes. Un test a même été développé pour les producteurs de vin afin d’évaluer la quantité de pourriture de Botrytis dans les raisins nouvellement récoltés.
Les immunoessais à flux latéral sont essentiellement des immunoessais adaptés pour fonctionner le long d’un seul axe pour convenir au format de la bandelette de test. Un certain nombre de variations de la technologie ont été développées en produits commerciaux, mais elles fonctionnent toutes selon le même principe de base.
Comment fonctionne un dosage immunochromatographique à flux latéral ?
Une bandelette de test typique se compose des éléments suivants :
- Tampon d’échantillon – un tampon absorbant sur lequel l’échantillon à tester est appliqué
- Tampon conjugué ou réactif – il contient des anticorps spécifiques de l’analyte cible conjugués à des particules colorées (généralement des particules d’or colloïdal, ou des microsphères de latex)
- Membrane de réaction – généralement une membrane hydrophobe en nitrocellulose ou en acétate de cellulose sur laquelle sont immobilisés des anticorps anti-analyte cible en ligne à travers la membrane comme zone de capture ou ligne de test (une zone de contrôle peut également être présente, contenant des anticorps spécifiques des anticorps conjugués)
- Mèche ou réservoir de déchets – un tampon absorbant supplémentaire conçu pour attirer l’échantillon à travers la membrane de réaction par action capillaire et le recueillir
Les composants de la bandelette sont généralement fixés sur un matériau de support inerte et peuvent être présentés sous la forme d’une simple bandelette ou à l’intérieur d’un boîtier en plastique avec un port d’échantillon et une fenêtre de réaction montrant les zones de capture et de contrôle.
Il existe deux principaux types d’essais immunologiques à flux latéral utilisés dans les tests microbiologiques :
Essais sandwich à double anticorps Dans ce format, l’échantillon migre du tampon d’échantillon à travers le tampon conjugué où tout analyte cible présent se fixera au conjugué. L’échantillon continue ensuite à migrer sur la membrane jusqu’à ce qu’il atteigne la zone de capture où le complexe cible/conjugué va se lier aux anticorps immobilisés produisant une ligne visible sur la membrane. L’échantillon continue ensuite à migrer le long de la bande jusqu’à ce qu’il atteigne la zone de contrôle, où l’excès de conjugué se lie et produit une deuxième ligne visible sur la membrane. Cette ligne de contrôle indique que l’échantillon a migré sur la membrane comme prévu. Deux lignes claires sur la membrane constituent un résultat positif. Une seule ligne dans la zone de contrôle est un résultat négatif. Les tests sandwiches à double anticorps sont les plus adaptés aux analytes de grande taille, tels que les agents pathogènes bactériens et les virus, avec de multiples sites antigéniques.
Tests compétitifs Les tests compétitifs sont principalement utilisés pour tester les petites molécules et diffèrent du format sandwich à double anticorps en ce que le tampon conjugué contient des anticorps qui sont déjà liés à l’analyte cible, ou à un analogue de celui-ci. Si l’analyte cible est présent dans l’échantillon, il ne se liera donc pas au conjugué et restera non marqué. Lorsque l’échantillon migre le long de la membrane et atteint la zone de capture, un excès d’analyte non marqué se lie aux anticorps immobilisés et bloque la capture du conjugué, de sorte qu’aucune ligne visible n’est produite. Le conjugué non lié se lie alors aux anticorps de la zone de contrôle, ce qui produit une ligne de contrôle visible. Une seule ligne de contrôle sur la membrane est un résultat positif. Deux lignes visibles dans les zones de capture et de contrôle constituent un résultat négatif. Cependant, si un excès d’analyte cible non marqué n’est pas présent, une ligne faible peut être produite dans la zone de capture, indiquant un résultat non concluant. Les tests compétitifs sont les plus appropriés pour tester les petites molécules, telles que les mycotoxines, incapables de se lier à plus d’un anticorps simultanément. Il existe un certain nombre de variantes de la technologie du flux latéral. La zone de capture sur la membrane peut contenir des antigènes ou des enzymes immobilisés – en fonction de l’analyte cible – plutôt que des anticorps. Il est également possible d’appliquer plusieurs zones de capture pour créer un test multiplex. Par exemple, des bandelettes commerciales capables de détecter séparément les deux toxines de Shiga EHEC ST1 et ST2 dans le même échantillon ont été développées.
Les immunodosages à flux latéral sont simples à utiliser par des opérateurs non formés et produisent généralement un résultat en 15 minutes. Ils sont très stables et robustes, ont une longue durée de conservation et ne nécessitent généralement pas de réfrigération. Ils sont également relativement peu coûteux à produire. Ces caractéristiques les rendent idéales pour une utilisation au point de service et pour l’analyse d’échantillons sur le terrain, ainsi qu’en laboratoire. Cependant, leur sensibilité est limitée sans procédures supplémentaires de concentration ou de culture.
Tests quantitatifs Alors que la plupart des immunodosages à flux latéral ne sont capables de fournir qu’un résultat qualitatif, il est possible d’obtenir un certain degré de quantification en mesurant la quantité de conjugué liée à la zone de capture. Pour ce faire, on peut utiliser un lecteur dédié qui mesure l’intensité de la ligne de test colorée. Par exemple, Neogen Corporation a mis au point le lecteur à flux latéral Accuscan™ à utiliser avec sa gamme de kits de dosage Reveal® et Charm Sciences fournit également un lecteur pour sa gamme Rosa® de bandelettes réactives pour mycotoxines. Des techniques plus sophistiquées, telles que les conjugués marqués par un colorant fluorescent, ont également été développées pour améliorer le potentiel quantitatif des tests à flux latéral. Applications Au cours des 20 années qui ont suivi le lancement du premier test à flux latéral, un large éventail de tests différents a été mis au point sur la base de la même technologie. Les premiers kits disponibles dans le commerce étaient destinés au domaine du diagnostic clinique, mais il existe maintenant des produits ayant des applications dans presque toutes les branches de la microbiologie.
Microbiologie clinique – des tests à flux latéral ont été développés pour les pathogènes bactériens, les virus respiratoires et entériques, les parasites intestinaux et les toxines bactériennes. De nombreux produits d’immunodosage à flux latéral conçus pour le secteur clinique sont destinés à être utilisés au point de service pour l’analyse directe des échantillons de matières fécales, de sang et d’urine et des écouvillons de nez et de gorge, où la simplicité d’utilisation et la rapidité des tests sont essentielles à leur utilisation en dehors du laboratoire. Cependant, les mêmes bandes de test peuvent également être utiles comme test de confirmation rapide après la culture en laboratoire d’échantillons cliniques.
Microbiologie alimentaire et agricole – des bandes de test sont disponibles pour les agents pathogènes bactériens d’origine alimentaire, les toxines bactériennes et fongiques. Dans le secteur de la microbiologie alimentaire, les principales applications sont plus susceptibles d’être en laboratoire, bien qu’il existe des kits de test sur le terrain pour les mycotoxines dans les échantillons de grains. Les tests pour les pathogènes bactériens d’origine alimentaire impliquent généralement au moins une étape d’enrichissement avant que la bandelette de test soit utilisée pour confirmer la présence ou l’absence du pathogène. Certains fabricants, comme Hygiena, ont développé des milieux et des méthodes d’enrichissement spécialement conçus pour être utilisés avec les bandes de test à flux latéral. Les bandes de test peuvent également être utiles pour la confirmation rapide de l’identité des isolats bactériens à partir de tests microbiologiques conventionnels.
Microbiologie de l’eau et de l’environnement – nombre limité de tests disponibles.
Recevoir les dernières mises à jour des Méthodes de test microbiologique rapide envoyées à votre e-mail ? Abonnez-vous à la lettre d’information électronique gratuite de rapidmicrobiology
.