Isolation de Malassezia furfur d’un chat

Le genre Malasseziaconsiste en des levures lipophiles qui sont connues pour être des composants de la microflore de la peau humaine et de nombreux mammifères et oiseaux et sont rarement isolées de l’environnement (11). Ces levures ont la propriété physiologique typique d’utiliser les lipides comme source de carbone. À l’exception de Malassezia pachydermatis, les autres espèces du genre Malassezia ont besoin d’une supplémentation en acides gras à longue chaîne (C12 à C24) pour leur croissance in vitro. La taxonomie de ces levures a toujours été un sujet de controverse (8). Il y a quelques années, les espèces acceptées étaient M. furfur (Robin) Baillon 1889 et M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Récemment, le genre a été révisé sur la base de données moléculaires et des exigences en matière de lipides et a été élargi pour inclure sept espèces : M. furfur,M. pachydermatis, M. sympodialis,M. globosa, M. obtusa, M. restricta, et M. slooffiae (4).

M. furfur est un pathogène cutané opportuniste connu de l’homme. Il est l’agent causal du pityriasis versicolor, du pityriasis capitis, de la dermatite séborrhéique et de la folliculite. Néanmoins, l’importance des espèces de Malassezia augmente en tant qu’agent pathogène émergent, car elles ont été décrites comme causant des infections systémiques chez les patients immunodéprimés et chez les nouveau-nés qui reçoivent des lipides par voie intraveineuse (1, 12). Le but de cette enquête était d’étudier le microbiote lipophile des conduits auditifs externes de chats sans otite externe. Dans cet article, le premier isolement de M. furfur à partir d’un chat est décrit.

Les canaux auditifs externes de 33 chats domestiques (17 mâles et 16 femelles) sans otite externe ont été échantillonnés à l’aide d’un écouvillon. Les échantillons ont été cultivés sur de la gélose au glucose de Sabouraud (SGA ; Biolife s.r.l., Milan, Italie), SGA complété avec de l’huile d’olive (10 ml/litre), et le milieu de Leeming (10 g de peptone, 5 g de glucose, 0,1 g d’extrait de levure, 4 g de bile de bœuf desséchée, 1 ml de glycérol, 0,5 g de monostéarate de glycérol, 0,5 ml de Tween 60, 10 ml de lait de vache entier, 12 g de gélose par litre, pH 6,2) (9). Tous les milieux contenaient 0,05 % de chloramphénicol et 0,05 % de cycloheximide. Chaque frottis de cérumen a été fixé par la chaleur, coloré avec Diff-Quick et examiné au microscope pour détecter la présence de cellules typiques de Malassezia. Les plaques ont été incubées à 35°C et examinées après 3, 5, 7 et 14 jours. Lorsque la croissance a été détectée, cinq colonies différentes ont été sélectionnées dans le SGA complété par de l’huile d’olive et dans le milieu de Leeming et ont été sous-cultivées sur SGA pour déterminer leur dépendance aux lipides. M. pachydermatis a été identifié par sa morphologie microscopique et par sa capacité à se développer sur SGA. L’identification des levures lipo-dépendantes a été basée sur le test de diffusion du Tween proposé par Guillot et al. (7), le test d’assimilation du Cremophor EL, et la division de l’esculine décrite par Mayser et al. (10), et les souches types suivantes ont été utilisées comme témoins : M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (où NT signifie néotype), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T, et M. obtusa CBS 7876T (aimablement fournies par E. Guého et J. Guillot). Le test de diffusion du Tween permet de différencier les espèces lipidodépendantes en fonction de leur capacité à assimiler divers esters de sorbitan polyoxyéthylénés (Tweens 20, 40, 60 et 80). Cremophor EL contient de l’huile de ricin et de l’acide ricinoléique et est utilisé comme caractère clé supplémentaire pour la différenciation des espèces M. furfur, M. slooffiae, et M. sympodialis.

Des cellules Malassezia typiques étaient évidentes dans les frottis de cérumen colorés au Diff-Quick de sept chats, mais seuls cinq de ces échantillons étaient positifs par culture. Des espèces de Malassezia ont été isolées chez sept chats (21,2%), mais dans deux frottis colorés au Diff-Quick de ces chats, les cellules typiques de Malassezia n’ont pas été détectées. Les levures appartenant à d’autres espèces n’ont pas été isolées. Chez six chats (18,1 %), seul M. pachydermatis a été isolé au cours de la première semaine d’incubation (trois isolats ont été cultivés à 3 jours, deux à 5 jours et un à 7 jours). Seule une espèce lipo-dépendante a été isolée chez un chat à 7 jours d’incubation. Cet isolat a formé des colonies crémeuses, lisses et ombonates d’un diamètre moyen de 4,3 mm sur une gélose Dixon modifiée (36 g d’extrait de malt, 6 g de peptone, 20 g de bile de bœuf desséchée, 10 ml de Tween 40, 2 ml de glycérol, 2 ml d’acide oléique, 12 g de gélose par litre, pH 6,0) (4) après 7 jours d’incubation à 32°C. La texture était friable et les colonies avaient un diamètre moyen de 4,3 mm. La texture était friable, et les cellules étaient ovoïdes à sphériques (1,5 à 3,0 μm par 1,5 à 4 μm). Des bourgeons étaient formés sur une base large, et de courts filaments étaient observés dans certaines cellules. La réaction à la catalase était positive. Cet isolat utilisait les quatre Tweens (20, 40, 60 et 80), assimilait le Cremophor EL et était faiblement positif pour le fractionnement de l’esculine, tout comme les souches types M. furfur CBS 1878T et M. furfur CBS 7019NT (Fig.1). Selon ces résultats, cette levure lipo-dépendante a été identifiée comme M. furfur(7, 10).

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