Manuel de laboratoire de biologie I

Ce que vous devriez être en mesure d’expliquer à quelqu’un d’autre après ce laboratoire :

• Composé
• Grandissement total
• Binoculaire
• Champ de vision
• Profondeur de champ
• Phénomène d’inversion

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Diaporama

Contexte

De nombreux organismes (bactéries) et parties d’organismes (cellules) que les biologistes étudient sont trop petits pour être vus par l’œil humain. Nous utilisons des microscopes pour agrandir les spécimens que nous étudions. Le mot microscope signifie « voir petit » et le premier microscope primitif a été créé en 1595.

Il existe plusieurs types de microscopes mais vous utiliserez surtout un microscope à lumière composée. Ce type de microscope utilise la lumière visible focalisée à travers deux lentilles, l’oculaire et l’objectif, pour visualiser un petit spécimen. Seules les cellules suffisamment fines pour que la lumière les traverse seront visibles avec un microscope optique dans une image bidimensionnelle.

Un autre microscope que vous utiliserez en laboratoire est un microscope stéréoscopique ou un microscope à dissection. Ce type de microscope utilise la lumière visible visualiser des spécimens plus épais et plus grands, comme un insecte, en 3D. Puisque vous visualisez des échantillons plus grands, la plage de grossissement du microscope à dissection est inférieure à celle du microscope à lumière composée.

Votre instructeur passera en revue les parties et les fonctions des microscopes à lumière composée que nous utiliserons tout au long du semestre. Remplissez le tableau de la page suivante pour vous aider à vous souvenir de ces informations importantes. Vous allez probablement vous référer à cette page fréquemment. Voici l’image d’un microscope optique pour que vous puissiez l’étiqueter et prendre des notes.

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Partie du microscope	Fonction
Oculaires (oculaires)
Bras
Doseur tournant
Scène
Objectifs
Clips coulissants
Molette de commande de la scène
Condenseur
Diaphragme iris
Lampe de sous-scène (Illuminateur)
Réglage grossier
Réglage fin
Réglage fin réglage
Base

Règles et instructions pour l’utilisation des microscopes à lumière composée

Votre instructeur discutera de l’utilisation du microscope avec votre classe. Les étapes à suivre pour une mise au point correcte seront passées en revue. Vous devez suivre la séquence étape par étape telle qu’indiquée par votre instructeur. Même si vous êtes familier avec ce type de microscope, on s’attend à ce que vous passiez en revue la mise au point avec le reste de la classe.

1. Règles générales importantes :
   1. Toujours porter le microscope à 2 mains – placer une main sur le bras du microscope et l’autre main sous la base du microscope.
   2. Ne pas toucher les lentilles des objectifs (c’est-à-dire les pointes des objectifs).
   3. Gardez les objectifs en position de balayage et gardez la platine basse lorsque vous ajoutez ou retirez des lames.
   4. Regardez toujours le microscope de côté lorsque vous effectuez des changements importants dans la hauteur de la platine.
   5. Les lentilles des objectifs doivent être nettoyées uniquement avec du papier spécial pour lentilles et du liquide de nettoyage pour lentilles.
   6. Ne jouez PAS au handyperson – aucun microscope ne doit être démonté. Signalez les dysfonctionnements à votre instructeur.
2. Pour obtenir un microscope de l’armoire du laboratoire:
   1. D’abord, libérez un espace sur la table pour le microscope-évitez une zone de travail encombrée.
   2. Les microscopes sont numérotés en fonction de l’endroit où vous êtes assis. Trouvez le numéro sous votre banc et utilisez le microscope correspondant.
   3. Portez le microscope à DEUX mains.
   4. Sécurisez le cordon électrique – ne le laissez pas pendre de la table !
3. Lorsque vous remettez le microscope dans le meuble du laboratoire :
   1. Abaissez la platine.
   2. Retournez l’objectif de balayage en position au-dessus de la platine.
   3. Retirez votre lame de la platine.
   4. Nettoyez la lame et l’objectif à l’aide du liquide spécial de nettoyage des lentilles et du papier fourni.
   5. Centrez la platine de façon à ce qu’elle ne dépasse pas trop d’un côté ou de l’autre.
   6. Sécurisez le cordon en l’enroulant sous la platine du microscope..
   7. Remettre en place la housse anti-poussière.
   8. Porter le microscope à DEUX mains.
   9. Retourner le microscope dans le même casier d’où vous l’avez obtenu en vous assurant de le mettre en bras dehors.
4. Pour faire la mise au point du microscope:
   Regarder le microscope de côté:
   1. Abaisser la platine aussi loin que possible.
      1. Retournez les objectifs de façon à ce que l’objectif de balayage pointe vers le bas sur la platine.
      2. Réglez la platine de façon à ce que l’ouverture (l’ouverture au milieu de la platine) soit centrée.
      3. Placez votre lame sur la platine, en utilisant la pince de platine pour la fixer. La pince de platine ne se déplace que dans le plan horizontal de la platine, et elle fixe la diapositive en touchant à peine le coin inférieur droit de la diapositive.
      4. Centrez le spécimen sur votre diapositive sous l’objectif en déplaçant la platine.
      5. Montez la platine presque au maximum, en faisant attention à ce que la diapositive ne touche pas la lentille de l’objectif – regardez de côté pour voir à quelle hauteur il faut monter la platine.
   2. Regardez à travers les oculaires :
      1. Utilisez la molette de réglage grossier pour déplacer la platine vers le bas jusqu’à ce que votre spécimen soit mis au point, puis affinez la mise au point.
      2. Centrez le spécimen dans le champ du microscope en déplaçant la platine.
   3. Regardez le microscope de côté :
      1. Tournez lentement l’objectif de faible puissance (10X) en position.
   4. Regardez à travers les oculaires :
      1. Aiguisez la mise au point, si nécessaire, avec le bouton de réglage grossier. Seule une quantité minimale de réglage est généralement nécessaire.
      2. Centrez le spécimen dans le champ, si nécessaire.
   5. Regardez le microscope de côté:
      1. Retournez l’objectif de haute puissance en place très soigneusement!
   6. Regardez à travers les oculaires:
      1. En utilisant uniquement le bouton de réglage fin, affinez la mise au point. Recentrez-vous si nécessaire. (Si votre spécimen a « disparu », revenez immédiatement à la faible puissance et recentrez le spécimen.)
      2. Lorsque vous retirez une lame, remettez toujours les objectifs en position de balayage et abaissez la platine avant de soulever la lame !

Partie 1 : Grossissement total

Le grossissement est le rapport entre la taille de l’image avec le microscope et la taille réelle de l’objet. Lorsque vous dites que le grossissement est de 10, l’image que vous voyez en utilisant le microscope est dix fois plus grande que l’observation du spécimen à l’œil nu. Rappelez-vous qu’avec un microscope à lumière composée, vous grossissez avec deux lentilles, donc pour calculer le grossissement total, vous multipliez le grossissement de l’objectif par le grossissement de l’oculaire. Regardez le microscope et utilisez le tableau ci-dessous pour calculer le grossissement total pour chaque lentille :

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	Lentille d’objectif	Lentille oculaire	= Grossissement total
Objectif de balayage
Bas objectif
Haut objectif

Partie 2 : Phénomène d’inversion

Ayez une diapositive de la lettre « e » disponible dans la classe. Observez la lame avec vos yeux, puis placez-la sur le microscope. Utilisez la séquence de mise au point pour observer la diapositive à faible puissance.

Procédure

1. Dessinez la lettre « e » telle qu’elle apparaît lorsque vous regardez la diapositive sans le microscope.
2. Dessinez la lettre « e » telle qu’elle apparaît lorsque vous regardez la diapositive sous le microscope.
3. Déplacez votre diapositive vers la droite en utilisant le levier mécanique de la platine tout en regardant à travers les oculaires. Dans quel sens se déplace le « e » ?
4. Déplacez votre lame en l’éloignant de vous à l’aide du levier de la platine mécanique tout en regardant à travers les oculaires. Dans quel sens le « e » se déplace-t-il ?

Indiquez le phénomène d’inversion dans vos propres mots.

Partie 3 : Champ de vision

Le champ de vision est la quantité de spécimen que vous voyez lorsque vous regardez à travers les objectifs. Le champ de vision diminue à des grossissements plus élevés.

Procédure

Placez une règle en plastique bleu en travers de l’ouverture de la platine de façon à ce que le bord de la règle soit visible comme une ligne verticale le long du diamètre du champ. Estimez la taille du champ en millimètres pour chacun des objectifs.

Scan __________ Bas (10X) __________ Haut (40X) __________

Partie 4 : Profondeur de champ

La profondeur de champ est l’épaisseur du spécimen qui reste au point à un grossissement donné. La profondeur de champ diminue à des grossissements plus élevés.

Procédure

Obtenir une lame de fils colorés, et l’observer sous balayage ou à faible puissance. Ensuite, déterminez quel fil de couleur se trouve :

• Sur le dessus
• Au milieu
• Sur le dessous

Instruction : en utilisant les instructions de mise au point, concentrez-vous sur la zone où les trois fils se croisent. Utilisez la mise au point fine pour discerner l’ordre des fils.

Partie 5 : Réalisation d’un montage humide

Tout au long du semestre, vous devrez réussir un certain nombre de préparations diapositives simples appelées « montages humides ». Le spécimen à observer est placé sur une lame propre, une ou deux gouttes d’eau sont ajoutées, et une lamelle couvre-objet est soigneusement placée sur l’eau et le spécimen. Votre instructeur vous fera la démonstration de cette technique.

Faites un montage humide d’eau d’étang en suivant la procédure ci-dessous :

1. Placez une goutte d’eau d’étang sur une lame de verre propre à l’aide de la pipette plastique jetable.
2. Couvrez l’eau d’étang sur la lame avec une lamelle. Essayez de placer le couvre-objet à un angle pour éviter les bulles d’air.
3. Essuyez tout excès de liquide sur votre lame.
4. Placez la lame sur le microscope pour observer le spécimen.
   1. Débutez sur l’objectif de balayage
   2. Passez soigneusement aux objectifs bas et haut si nécessaire.

Avec un peu de chance, vous verrez des organismes vivants dans l’eau de votre bassin. Si vous voyez des matières vertes, il s’agit probablement d’une sorte de plante. Regardez s’il y a quelque chose qui bouge. Dans l’espace ci-dessous, décrivez ce que vous observez au microscope et dessinez une image simple.

Partie 6 : Microscope à dissection stéréoscopique

Votre instructeur vous montrera comment utiliser correctement le microscope à dissection. Ces microscopes donnent généralement un grossissement plus faible que le microscope composé que vous utilisez.

Procédure

Voyez les spécimens disponibles à la table du laboratoire en utilisant le microscope à dissection. Remarquez que le microscope possède deux sources de lumière, une par la base et une par le haut. Les spécimens ne sont pas toujours montés sur une lame. Notez également que lorsque vous regardez des objets sous le microscope à dissection, ils sont tridimensionnels.

Nettoyage et entretien du microscope

1. Décrivez comment et avec quoi vous devez nettoyer la lentille du microscope.
2. Listez quatre choses que vous devez faire lorsque vous avez fini d’utiliser le microscope à la fin du laboratoire.