Isolation of Malassezia furfur from a Cat

A Malassezia nemzetség lipofil élesztőgombákból áll, amelyekről ismert, hogy az emberi bőr és számos emlős és madár mikroflórájának összetevői, és ritkán izolálhatók a környezetből (11). Ezeknek az élesztőgombáknak jellemző élettani tulajdonságuk, hogy szénforrásként lipideket használnak. A Malassezia pachydermatis kivételével a Malassezia nemzetség többi fajának hosszú láncú (C12-C24) zsírsavakkal való kiegészítésre van szüksége az in vitro növekedéshez. Ezeknek az élesztőgombáknak a taxonómiája mindig is vita tárgyát képezte (8). Néhány évvel ezelőtt az elfogadott fajok a következők voltak: M. furfur (Robin) Baillon 1889 és M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. A közelmúltban a nemzetséget molekuláris adatok és lipidigény alapján felülvizsgálták, és hét fajra bővítették: M. furfur, M. pachydermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta és M. slooffiae (4).

A M. furfur az ember ismert opportunista bőrpatogénje. A pityriasis versicolor, a pityriasis capitis, a seborrheás dermatitis és a folliculitis kórokozója. Mindazonáltal a Malassezia fajok mint újonnan megjelenő kórokozók jelentősége egyre nő, mivel leírták, hogy immunhiányos betegeknél és intravénásan lipideket kapó újszülötteknél szisztémás fertőzéseket okoznak (1, 12). A felmérés célja a külső fülgyulladással nem rendelkező macskák külső hallójáratainak lipofil mikrobiótájának vizsgálata volt. Ebben a közleményben a M. furfur első izolálását írjuk le macskából.

33 házimacska (17 hím és 16 nőstény) otitis externa nélküli külső hallójáratából vettünk mintát tampon segítségével. A mintákat Sabouraud glükóz agaron (SGA; Biolife s.r.l., Milánó, Olaszország), olívaolajjal kiegészített SGA (10 ml/liter) és Leeming táptalajon (10 g pepton, 5 g glükóz, 0,1 g élesztőkivonat, 4 g deszikkált ökörsav, 1 ml glicerin, 0,5 g glicerin-monosztearát, 0,5 ml Tween 60, 10 ml teljes tehéntej, 12 g agar literenként, pH 6,2) (9). Minden táptalaj 0,05% klóramfenikolt és 0,05% cikloheximidet tartalmazott. Minden egyes cerumen kenetet hőfixáltunk, Diff-Quickkel festettünk, és mikroszkóposan megvizsgáltuk a jellegzetes Malassezia-sejtek jelenlétét. A lemezeket 35 °C-on inkubáltuk, és 3, 5, 7 és 14 nap múlva megvizsgáltuk. Ha növekedést észleltünk, öt különböző kolóniát választottunk ki az olívaolajjal kiegészített SGA-ból és a Leeming táptalajból, és SGA-n szubkultúráztuk őket, hogy meghatározzuk a lipidfüggőségüket. A M. pachydermatist mikroszkópos morfológia és az SGA-n való növekedési képesség alapján azonosították. A lipidfüggő élesztők azonosítása a Guillot és munkatársai (7) által javasolt Tween-diffúziós teszten, a Cremophor EL asszimilációs teszten és a Mayser és munkatársai (10) által leírt eszkulin hasításon alapult, és a következő típustörzseket használtuk kontrollként: M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (ahol az NT a neotípust jelenti), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T és M. obtusa CBS 7876T (E. Guého és J. Guillot szíves hozzájárulásával). A Tween-diffúziós teszt lehetővé teszi a lipidfüggő fajok megkülönböztetését aszerint, hogy képesek-e különböző polioxi-etilén-szorbitán-észterek (Tweens 20, 40, 60 és 80) asszimilálására. A Cremophor EL ricinusolajat és ricinolsavat tartalmaz, és további kulcsjellemzőként használják a M. furfur, M. slooffiae és M. sympodialis fajok megkülönböztetéséhez.

A hét macskából származó cerumen Diff-Quick-festésű keneteiben tipikus Malassezia-sejtek voltak kimutathatók, de ezek közül csak öt minta volt pozitív tenyésztéssel. Hét macskából (21,2%) izoláltak Malassezia fajokat, de e macskák két Diff-Quick-festett kenetében nem voltak kimutathatók a tipikus Malassezia-sejtek. Más fajokhoz tartozó élesztőgombákat nem izoláltak. Hat macskából (18,1%) csak a M. pachydermatis-t izolálták az inkubáció első hetében (három izolátumot 3 napon, kettőt 5 napon, egyet pedig 7 napon növesztettek). Csak egy macskából izoláltak egy lipidfüggő fajt az inkubáció 7. napján. Ez az izolátum krémszínű, sima és umbonátos kolóniákat képzett 4,3 mm átlagos átmérőjű, módosított Dixon-agaron (36 g malátakivonat, 6 g pepton, 20 g deszikkált ökörsav, 10 ml Tween 40, 2 ml glicerin, 2 ml olajsav, 12 g agar literenként, pH 6,0) (4) 7 napos, 32 °C-on történő inkubáció után. A textúra morzsalékos volt, és a sejtek tojásdad vagy gömb alakúak voltak (1,5-3,0 μm x 1,5-4 μm). A rügyek széles alapon képződtek, és néhány sejtben rövid fonalakat lehetett látni. A katalázreakció pozitív volt. Ez az izolátum hasznosította a négy Tweent (20, 40, 60 és 80), asszimilálta a Cremophor EL-t, és gyengén pozitív volt az eszkulinhasadásra, akárcsak a M. furfur CBS 1878T és a M. furfur CBS 7019NT típustörzsek (1. ábra). Ezen eredmények alapján ezt a lipidfüggő élesztőt M. furfurként azonosították(7, 10).