Introduzione
I blocchi di tessuto inclusi in paraffina si riferiscono solitamente a campioni di tessuto inclusi in paraffina fissati in formalina (FFPE) che sono stati usati in varie applicazioni terapeutiche e nella ricerca per molti decenni. Si tratta di un metodo utilizzato per conservare e preparare campioni biologici da utilizzare nella ricerca sperimentale, nell’esame, nella diagnosi e nello sviluppo terapeutico. Il campione di tessuto viene prima conservato attraverso la fissazione con formalina o formaldeide per garantire che le strutture vitali e le proteine all’interno del tessuto rimangano il più vicino possibile alla condizione di quando è ancora parte dell’ospite. Dopo la fissazione, viene incorporato in un blocco di cera di paraffina per facilitare il sezionamento e il montaggio su vetrini microscopici a scopo di esame.
Processo
I tessuti vengono prima raccolti da ospiti sia malati che normali. Nei biospecifici del cancro, l’oncologo spesso confronta il tumore primario con campioni che sono ottenuti da siti metastatici lontani. I tessuti ottenuti di solito misurano solo pochi centimetri a seconda della natura e della fonte e del tessuto. Subito dopo l’escissione, il biospecifico viene immerso in formalina neutra tamponata al 10% per 18-24 ore per indurire il tessuto. Viene poi disidratato e pulito usando concentrazioni crescenti di etanolo. Viene poi incorporato in paraffina di grado immunoistochimico che è specificamente utilizzata per l’incorporazione di tessuti fissati in formalina. Uno dei fattori più cruciali è il tempo di fissazione, poiché i tessuti fissati troppo presto possono essere inutilizzabili per studi di biologia molecolare. La durata della fissazione deve essere abbastanza lunga da garantire la conservazione.
Una volta acquisiti, i campioni vengono manipolati con cura per mantenere la qualità. La mancanza di una corretta manipolazione può portare all’esibizione di caratteristiche insolite che possono influenzare i risultati o le deduzioni della ricerca. Il metodo di preparazione di solito dipende dai requisiti del team di ricerca. Può variare da specifiche riguardanti lo scopo del tessuto, le dimensioni o il taglio del tessuto. Un buon esempio potrebbe essere il taglio del muscolo lungo la “grana” della fibra muscolare o attraverso di essa. Durante tutta la preparazione del campione, un patologo medico certificato sarà coinvolto per garantire che la procedura sia completata accuratamente e anche per la valutazione della qualità.
Una volta che i campioni sono completati, vengono conservati nelle banche dei tessuti. Dovrebbero essere conservate anche le registrazioni utili come le informazioni demografiche e quando il tessuto è stato raccolto o conservato, in quanto possono essere utili per il team di ricerca. Altre informazioni critiche che dovrebbero essere conservate includono i moduli di consenso firmati e i documenti legali affiliati al biospecimen in quanto possono avere un impatto sull’utilizzabilità del biospecimen nella ricerca e negli studi clinici.
Applicazioni
I blocchi di tessuto inclusi in paraffina hanno molte applicazioni nella ricerca. Questi blocchi di tessuto sono spesso usati nell’immunoistochimica dove le sezioni di tessuto sono montate su un vetrino. Queste sezioni vengono poi bagnate con una soluzione che contiene anticorpi che si legano alle proteine e alle strutture. La colorazione può anche essere eseguita per aiutare la visualizzazione degli anticorpi che mostra la posizione delle strutture presenti nel campione. Questa informazione può essere fondamentale per aiutare le diagnosi di malattie come il morbo di Alzheimer o il cancro. Le informazioni ottenute dall’immunoistochimica sono anche vitali per molti progetti sul cancro che vengono eseguiti oggi nei laboratori. Alcune delle aree terapeutiche in cui i campioni di tessuto sono comunemente usati sono:
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Immunologia – le risposte del sistema immunitario sono analizzate sia nello stato malato che in quello sano. Lo studio dei campioni di tessuto di un paziente con una malattia autoimmune aiuta a determinare la causa e lo sviluppo di una terapia per coloro che ne sono affetti.
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Ematologia – i blocchi di tessuto rivestiti di paraffina sono vitali nello studio di vari disturbi del sangue e correlati. L’ematologia è un campo cruciale che ha contribuito alla scoperta di molte cure per le malattie legate al sangue e ai suoi componenti. Alcuni studi correlati a questo campo includono studi sul midollo osseo che possono includere la genetica, la tossicologia e la rigenerazione dei tessuti.
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Oncologia – i blocchi di tessuto inclusi in paraffina sono importanti in oncologia perché i tessuti tumorali conservati hanno morfologie caratteristiche che non sono presenti in altri tessuti. I team di ricerca spesso usano questi campioni per cercare proteine che possono aiutare nella diagnosi e nella valutazione della malattia. I tessuti tumorali fissati in formalina con inclusione di paraffina (FFPE) generalmente dovrebbero avere un contenuto tumorale del 60%.
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Comparativo – ci sono anche blocchi di tessuto inclusi in paraffina che sono tessuti sani raccolti da donatori sani. Questi tessuti sono usati per scopi comparativi e sono anche importanti per la ricerca e lo sviluppo.
Svantaggio
Nei blocchi di tessuto inclusi in paraffina, il processo di fissazione di solito richiede l’uso di formalina o formaldeide che denatura le proteine che sono nel campione di tessuto. Questo può far sì che le proteine siano invisibili agli anticorpi che sono specificamente sviluppati per rilevarle. Per compensare, sono state sviluppate tecniche di recupero dell’antigene per recuperare specificamente proteine, DNA e RNA da questi blocchi di tessuto. Questo aiuta ad aprire un vasto archivio di materiale conservato e annotato per studi di biochimica e biologia molecolare.
Conclusione
La qualità dei blocchi di tessuto inclusi in paraffina è fondamentale per il lavoro che utilizza questi campioni come fonte di proteine, DNA e RNA. Ciò è dovuto al fatto che anche il tessuto meglio conservato conterrà proteine inattive parzialmente degradate, DNA e RNA.