[Evoluzione delle ricerche IGRA]

Il progresso dell’analisi genomica nel micobatterio, compreso il M. tuberculosis (Mtb), ha permesso di trovare gli antigeni Mtb-specifici, ESAT-6 e CFP-10, che inducono un forte interferone-gamma (IFN-gamma) dalle cellule T sensibilizzate. Poco dopo la scoperta di questi antigeni, sono stati sviluppati test diagnostici per l’infezione da tubercolosi (TB) utilizzando questi antigeni. Poiché ESAT-6 e CFP-10 sono assenti da tutti i sottospecie di BCG e dalla maggior parte dei micobatteri non tubercolosi, questi test diagnostici non sono confusi con la vaccinazione BCG e l’infezione della maggior parte dei micobatteri non tubercolosi. Questi test diagnostici sono chiamati Interferon-Gamma Release Assays (IGRAs), e attualmente ci sono due test disponibili in commercio. Uno di essi, QuantiFERON-TB Gold (chiamato QuantiFERON TB-2G in Giappone, QFT-2G) basato sul metodo ELISA è stato approvato in Giappone, e l’altro è T-SPOT. TB che si basa sul metodo ELISPOT e non è stato ancora approvato in Giappone. Come in generale T-SPOT. TB ha dimostrato di essere più sensibile del QFT-2G, l’approvazione del T-SPOT. TB in Giappone sarebbe attesa. Tuttavia, ci sono molte domande da risolvere in IGRAs, dal momento che abbiamo appena iniziato a utilizzare questi test. Un documento che ha integrato queste domande è stato pubblicato l’anno scorso, e sarebbe utile. In questo mini-simposio, il Dr. Peter Andersen ha riferito i progressi dello sviluppo di test diagnostici per l’infezione da tubercolosi, la possibilità di distinguere tra TB attiva e infezione latente da TB (LTBI), cosa che gli attuali IGRA non fanno, e l’uso prognostico degli IGRA (Il contenuto giapponese è stato riportato dai presidenti). Il Dr. Ariga ha riferito l’applicazione del QFT-2G per campioni diversi dal sangue. Ha anche riportato i dati interessanti su quali cellule T hanno risposto nella QFT-2G. Il Dr. Higuchi ha riportato in modo esauriente i dati su diverse domande del test QFT-2G. Attualmente l’uso degli IGRA si sta espandendo rapidamente. In questa circostanza, sarebbe molto importante comprendere correttamente le caratteristiche degli IGRA. Speriamo che questo mini-simposio possa aiutare a capire questi problemi. 1. Interferon-Gamma Release Assays (IGRA) e antigeni per il rilevamento dell’infezione latente e la previsione della malattia: Peter ANDERSEN (Dipartimento di immunologia delle malattie infettive e Centro SSI per la ricerca sui vaccini, Statens Serum Institut, Danimarca) Una delle sfide più importanti nel controllo globale della tubercolosi è la diagnosi e il trattamento dell’infezione tubercolare latente. Il metodo attualmente utilizzato per la rilevazione dell’infezione tubercolare latente, il test cutaneo alla tubercolina, ha una bassa specificità. L’identificazione di antigeni specifici per il Mycobacterium tuberculosis per sostituire il derivato proteico purificato è stata quindi una delle principali priorità della ricerca internazionale. Abbiamo eseguito una valutazione rigorosa del potenziale diagnostico degli antigeni che mancano dai ceppi del vaccino M. bovis bacille Calmette-Guérin, così come dalla maggior parte dei micobatteri non tubercolosi. Abbiamo identificato tre antigeni con un importante potenziale diagnostico: ESAT-6, CFP-10 e TB 7.7. Questi antigeni sono attualmente utilizzati nei test IGRA come il QuantiFERON che misura la produzione di interferone-gamma dai linfociti T sensibilizzati, segnalando così l’infezione in corso. Nell’UE, negli Stati Uniti e in Giappone, dove questi test sono entrati nel mercato, il valore di questo approccio nella ricerca di contatti è diventato rapidamente evidente. Suggerirò che tali test possono essere modificati per identificare gli individui tra gli infetti latenti, a maggior rischio di sviluppare la TBC attiva contagiosa. Il trattamento mirato di questa parte della popolazione offre la possibilità di prevenire la TBC prima che diventi infettiva, il che contribuirebbe notevolmente al controllo finale di questa epidemia globale. 2. Risposte immunitarie specifiche per l’antigene M. tuberculosis – sangue periferico e siti di infiammazione: Haruyuki ARIGA (National Hospital Organization Tokyo National Hospital) Per sviluppare un metodo più accurato per diagnosticare la pleurite tubercolare attiva, così come la peritonite, la meningite e la pericardite di origine tubercolare, abbiamo stabilito un test di rilascio di interferone-gamma (IFN-gamma) antigene-specifico usando campioni di liquido cavitario. I soggetti dello studio erano 30 pazienti con sierosite tubercolare attiva confermata batteriologicamente e 49 pazienti con eziologia definitiva non tubercolare. La coltura è stata eseguita per 18 ore con cellule mononucleate fluide nel surnatante del versamento insieme a soluzione fisiologica o peptidi antigenici specifici del Mycobacterium tuberculosis, il target antigenico precoce secretorio 6 e la proteina 10 del filtrato di coltura. Le concentrazioni di IFN-gamma nei surnatanti di coltura sono state misurate tramite ELISA. Nei pazienti con sierosite tubercolare attiva, le risposte IFN-gamma antigene-specifiche dei campioni di liquido cavitario erano significativamente più alte di quelle dei campioni di effusione non tubercolare. L’area sotto la curva delle caratteristiche operative del ricevitore era significativamente maggiore per la risposta dell’IFN-gamma del fluido cavitario rispetto all’adenosina deaminasi del fluido cavitario e al saggio di rilascio di IFN-gamma nel sangue intero. Il test di rilascio di IFN-gamma del liquido cavitario potrebbe essere un metodo non invasivo per diagnosticare accuratamente e prontamente la sierosite tubercolare in pazienti in cui si sospetta clinicamente la tubercolosi attiva nello spazio cavitario, ma per i quali non è possibile ottenere prove batteriologiche. 3. Diverse domande nelle IGRA: Kazue HIGUCHI (Istituto di Ricerca sulla Tubercolosi, Japan Anti-Tuberculosis Association). Anche se è stato raccomandato di usare il QFT-2G per le indagini di contatto nella linea guida rivista per le indagini di contatto dell’anno scorso, ci sono diverse domande nel QFT-2G. In questo mini-simposio, sono stati presentati i dati su diverse domande del test QFT-2G. Questi includevano l’applicazione della QFT-2G agli individui vulnerabili nel sistema immunitario come i neonati e i sieropositivi, gli effetti della chemioterapia sul test QFT-2G, la prognosi dello sviluppo della TBC attiva tramite QFT-2G, la prossima generazione di QFT-2G, la garanzia della qualità del test QFT-2G e alcuni problemi dell’attuale test QFT-2G. Dovrebbe essere importante ricercare queste domande e migliorare gli IGRA basati sull’immunologia di base.