Isolamento di Malassezia furfur da un gatto

Il genere Malasseziaconsiste in lieviti lipofili che sono noti per essere componenti della microflora della pelle umana e di molti mammiferi e uccelli e sono raramente isolati dall’ambiente (11). Questi lieviti hanno la tipica proprietà fisiologica di utilizzare i lipidi come fonte di carbonio. Ad eccezione della Malassezia pachydermatis, le restanti specie del genere Malassezia richiedono un’integrazione con acidi grassi a catena lunga (da C12 a C24) per la crescita in vitro. La tassonomia di questi lieviti è sempre stata oggetto di controversie (8). Alcuni anni fa, le specie accettate erano M. furfur (Robin) Baillon 1889 e M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Recentemente, il genere è stato rivisto sulla base di dati molecolari e requisiti lipidici ed è stato ampliato per includere sette specie: M. furfur, M. pachydermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, e M. slooffiae (4). È l’agente causale della pitiriasi versicolor, pitiriasi capitis, dermatite seborroica e follicolite. Tuttavia, l’importanza delle specie di Malassezia sta aumentando come patogeno emergente, perché sono state descritte come causa di infezioni sistemiche in pazienti immunocompromessi e in neonati che ricevono lipidi per via endovenosa (1, 12). Lo scopo di questa indagine è stato quello di studiare il microbiota lipofilo dei canali auricolari esterni dei gatti senza otite esterna. In questo articolo, viene descritto il primo isolamento di M. furfur da un gatto.

I canali auricolari esterni di 33 gatti domestici (17 maschi e 16 femmine) senza otite esterna sono stati campionati utilizzando un tampone. I campioni sono stati coltivati su Sabouraud glucosio agar (SGA; Biolife s.r.l., Milano, Italia), SGA integrato con olio d’oliva (10 ml/litro) e terreno di Leeming (10 g di peptone, 5 g di glucosio, 0,1 g di estratto di lievito, 4 g di bile di bue essiccata, 1 ml di glicerolo, 0,5 g di glicerolo monostearato, 0,5 ml di Tween 60, 10 ml di latte vaccino intero, 12 g di agar per litro, pH 6,2) (9). Tutti i mezzi contenevano lo 0,05% di cloramfenicolo e lo 0,05% di cicloesimide. Ogni striscio di cerume è stato fissato a caldo, colorato con Diff-Quick, ed esaminato al microscopio per la presenza di cellule tipiche di Malassezia. Le piastre sono state incubate a 35°C ed esaminate dopo 3, 5, 7 e 14 giorni. Quando è stata rilevata la crescita, cinque diverse colonie sono state selezionate dal SGA integrato con olio d’oliva e dal terreno di Leeming e subcoltivate su SGA per determinare la loro dipendenza dai lipidi. M. pachydermatis è stato identificato dalla morfologia microscopica e dalla capacità di crescere su SGA. L’identificazione dei lieviti dipendenti dai lipidi si è basata sul test di diffusione Tween proposto da Guillot et al. (7), sul test di assimilazione Cremophor EL e sulla scissione dell’esculina descritta da Mayser et al. (10); i seguenti ceppi tipo sono stati usati come controlli: M. furfur CBS 1878T, M. furfur CBS 7019NT (dove NT sta per neotipo), M. sympodialis CBS 7222T, M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T, e M. obtusa CBS 7876T (gentilmente forniti da E. Guého e J. Guillot). Il test di diffusione Tween permette di differenziare le specie dipendenti dai lipidi in base alla loro capacità di assimilare vari esteri di poliossietilene sorbitano (Tween 20, 40, 60, e 80). Cremophor EL contiene olio di ricino e acido ricinoleico ed è usato come ulteriore carattere chiave per la differenziazione delle specie M. furfur, M. slooffiae, e M. sympodialis.

Le cellule tipiche di Malassezia erano evidenti negli strisci colorati con Diff-Quick del cerume di sette gatti, ma solo cinque di questi campioni erano positivi alla cultura. Le specie di Malassezia sono state isolate da sette gatti (21,2%), ma in due strisci colorati con Diff-Quick di questi gatti, le tipiche cellule di Malassezia non sono state rilevate. I lieviti appartenenti ad altre specie non sono stati isolati. In sei gatti (18,1%), solo M. pachydermatis è stato isolato durante la prima settimana di incubazione (tre isolati sono stati coltivati a 3 giorni, due a 5 giorni e uno a 7 giorni). Solo una specie lipido-dipendente è stata isolata da un gatto a 7 giorni di incubazione. Questo isolato ha formato colonie cremose, lisce e umbonate con un diametro medio di 4,3 mm su agar Dixon modificato (36 g di estratto di malto, 6 g di peptone, 20 g di bile di bue essiccata, 10 ml di Tween 40, 2 ml di glicerolo, 2 ml di acido oleico, 12 g di agar per litro, pH 6,0) (4) dopo 7 giorni di incubazione a 32°C. La struttura era friabile e le cellule erano da ovoidali a sferiche (da 1,5 a 3,0 μm per 1,5 a 4 μm). Le gemme si sono formate su una base larga e in alcune cellule sono stati visti brevi filamenti. La reazione alla catalasi era positiva. Questo isolato ha utilizzato i quattro Tweens (20, 40, 60, e 80), assimilato Cremophor EL, ed era debolmente positivo per la scissione dell’esculina, come i ceppi tipo M. furfur CBS 1878T e M. furfur CBS 7019NT (Fig.1). In base a questi risultati, questo lievito dipendente dai lipidi è stato identificato come M. furfur(7, 10).