… bifida (SB) è il più comune difetto di nascita invalidante in Nord America, con una frequenza di , 3-4 ogni 10.000 nati vivi. La forma più comune e grave è il mielomeningocele (MM), che rappresenta oltre il 90% di tutti i casi di SB. Il MM è una lesione spinale caratterizzata da un’apertura nella colonna vertebrale attraverso la quale sporgono le meningi e i tessuti neurali. Le conseguenze cliniche della lesione spinale includono difficoltà di deambulazione, sensazione, incontinenza e problemi di apprendimento. I deficit di attenzione negli individui con MM sono stati identificati attraverso le valutazioni del disturbo da deficit di attenzione e iperattività (ADHD). I bambini con MM hanno più probabilità dei controlli di mostrare elevazioni clinicamente significative nelle valutazioni di ADHD (31% in MM vs 7% nella popolazione generale). In particolare, il 74,5% degli individui con MM con aumenti significativi nelle valutazioni dell’ADHD erano coerenti con il sottotipo prevalentemente disattento dell’ADHD. Uno studio indipendente di Ammerman et al. ha mostrato risultati simili. L’acido folico è una vitamina B importante anche in relazione al MM. Gli studi dimostrano che l’integrazione di acido folico diminuisce sia il verificarsi e la ricorrenza dei difetti del tubo neurale del 72% in sette paesi. Dati come questi hanno portato a raccomandazioni di salute pubblica di integrare con folato periconcezionale, e nel 1998 di fortificare tutti i prodotti di grano negli Stati Uniti con acido folico. L’acido folico è fondamentale per i processi cellulari tra cui la sintesi dei nucleotidi e la metilazione. L’enzima 5, 10-methylenetetrahy- drofolate reductase (MTHFR) funziona nel percorso che converte il folato in metaboliti che possono essere utilizzati per i processi cellulari tra cui la metilazione dei promotori genici e proteine, RNA, DNA, aminoacidi e fosfolipidi sintesi (vedi Figura 1). Per esempio, la metilazione dei fosfolipidi stimolata dalla dopamina (PLM) è suggerita come un importante meccanismo per modulare l’accensione dei neuroni e un’attività di metilazione alterata può contribuire ai disturbi dell’attenzione. Le cellule di neuroblastoma (SH-SY5Y) trattate con 5-formylTHF hanno causato un aumento della metilazione del recettore della dopamina D4 (DRD4) da parte della proteina metil-transferasi e della S-adenosil-metionina con un conseguente aumento dose-dipendente della PLM sia basale che stimolata dalla dopamina. DRD4 è uno dei geni più replicati identificati per associare l’ADHD. Varianti genetiche in MTHFR sono stati associati con MM. Le due varianti più comuni studiate sono C677T (rs1801133) e A1298C (rs1801131). La presenza di una di queste varianti in stato omozigote aumenta le probabilità di essere affetti da SB a 1,5 a 2,4 volte quello della popolazione generale, anche se i dati per 1298C è in contrasto. Diversi studi collegano i livelli di folati/omocisteina con le funzioni cognitive. Per esempio, i pazienti con carenze di folati nel sistema nervoso centrale mostrano deficit cognitivi. Morris et al. hanno dimostrato che, rispetto ai controlli, gli individui con bassi livelli di folato avevano una funzione di memoria significativamente ridotta. Altri studi mostrano risultati simili; cioè, le funzioni cognitive migliorano con livelli di folato più alti, e diminuiscono con livelli di omocisteina più alti. MTHFR è un regolatore chiave di folati rispetto ai livelli di omocisteina. In questo studio abbiamo testato se la variazione genetica nell’enzima del metabolismo dei folati MTHFR era associata alla manifestazione del fenotipo comportamentale ADHD nei bambini con MM. I partecipanti a questo studio erano una popolazione ampliata da quella utilizzata in Burmeister et al. Il campione genotipizzato per SNPs nel gene MTHFR consisteva di 262 individui MM. Il 50% di questi individui erano bianchi e il 50% erano ispanici. Il campione consisteva di 53% femmine e 47% maschi e l’età mediana era 12.4 anni. Le scale di valutazione dei genitori per l’ADHD sono state completate anche su altri pazienti per i quali il DNA non era disponibile. Questi pazienti sono stati utilizzati per confrontare la frequenza dei risultati dei test ADHD positivi negli individui MM rispetto ai test ADHD positivi nei controlli. Per questo confronto, le dimensioni del gruppo erano le seguenti: il campione MM consisteva di 478 pazienti e il campione di controllo consisteva di 196 individui di controllo non affetti da MM. L’etnia degli individui con MM e degli individui di controllo senza MM sono elencati nella tabella 1. Entrambi i campioni erano composti da circa il 50% di maschi e il 50% di femmine con un’età mediana di 13,06 anni nei pazienti con MM e un’età mediana di 12,73 anni nel gruppo di controllo. Questi esperimenti sono stati intrapresi con la comprensione e il consenso scritto di ogni soggetto rispettando il codice etico della World Medical Association. Lo studio è stato approvato dall’Institutional Review Board dell’Università del Texas Health Science Center di Houston con il numero di approvazione HSC-MS- 00-0001 e dall’Hospital for Sick Children Research Ethics Board con il numero di approvazione 1000006149. I genitori di ogni partecipante hanno completato la scala di valutazione Swanson Nolan Achenbach Pelham-IV (SNAP-IV; www.adhd.net) per valutare lo stato di ADHD. La scala SNAP-IV consiste di 18 articoli, 9 che rappresentano comportamenti associati alla disattenzione e 9 all’iperattività-impulsività. È progettata per allinearsi con i criteri del Diagnostic and Statistical Manual-IV (DSM-IV), ampiamente accettato come gold standard per la diagnosi di ADHD. I genitori hanno valutato il comportamento del loro bambino su una scala di quattro punti, da zero (per niente) a tre (molto), come precedentemente descritto. I partecipanti che hanno incontrato cutoff clinicamente definiti che rappresentano il 5% superiore della popolazione sulla scala di disattenzione sono stati designati ”ADHD-tipo prevalentemente disattento”; quelli con elevazioni nel 5% superiore solo sulla scala iperattività-impulsività rappresentato il ”Hyperactive-Impulsive Type”. L’elevazione su entrambe le scale rappresentava il ”Tipo combinato ADHD”. Lo SNAP-IV è una valutazione affidabile basata sui genitori del comportamento ADHD con buona concordanza con le interviste strutturate, ampiamente utilizzato per valutare l’ADHD in studi clinici e in numerosi studi di ricerca negli Stati Uniti e nel mondo. La selezione degli SNP, la genotipizzazione e l’analisi statistica sono state eseguite come precedentemente descritto. Brevemente, SNPs sono stati selezionati all’interno del gene di riferimento MTHFR (NM_005957) dalla University of California Santa Cruz (UCSC) Genome Browser dbSNP Build132 database così come il rilascio pubblico HapMap3 # 27. SNPs sono stati prioritari per la genotipizzazione in base alla funzione potenziale (ad esempio se la variante cambia l’amminoacido), la posizione del gene, e una frequenza allelica minore maggiore di 0,05. Un totale di 7 SNPs nel gene MTHFR sono stati selezionati (vedi Figura 2 per le posizioni approssimative): rs3737965, rs2066470, rs9651118, rs1801133 (noto anche come 677C . T), rs1801131 (noto anche come 1298A . C, rs2274976, e rs4846049. Il DNA è stato raccolto da pazienti con MM per l’analisi. La genotipizzazione è stata eseguita utilizzando il …
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