Viable Cell Counting
Er zijn verschillende manieren om het aantal bacteriën in een monster te tellen. Met een telling van levensvatbare cellen kan het aantal actief groeiende/delende cellen in een monster worden bepaald. De methode van het plaattellen of de spreidingsplaat berust op bacteriën die een kolonie vormen op een voedingsbodem. De kolonie wordt met het blote oog zichtbaar en het aantal kolonies op een plaat kan worden geteld. Om doeltreffend te zijn moet de verdunning van het oorspronkelijke monster zo zijn dat gemiddeld tussen 30 en 300 kolonies van de doelbacterie worden gekweekt. Minder dan 30 kolonies maakt de interpretatie statistisch ondeugdelijk en meer dan 300 kolonies resulteert vaak in overlappende kolonies en onnauwkeurigheid bij de telling. Om er zeker van te zijn dat een geschikt aantal kolonies wordt verkregen, worden gewoonlijk verscheidene verdunningen gekweekt. De laboratoriumprocedure houdt in dat seriële verdunningen van het monster (1:10, 1:100, 1:1000 enz.) in steriel water worden gemaakt en dat deze op voedingsbodem worden gekweekt in een schaaltje dat wordt afgesloten en geïncubeerd. Typische media zijn Plate count agar voor een algemene telling of MacConkey agar voor het tellen van gramnegatieve bacteriën zoals E. coli. Gewoonlijk wordt één stel platen geïncubeerd bij 22°C en gedurende 24 uur en een tweede stel bij 37°C en gedurende 24 uur. De samenstelling van de voedingsstof bevat gewoonlijk reagentia die de groei van niet-doelorganismen tegengaan en het doelorganisme gemakkelijk herkenbaar maken, vaak door een kleurverandering in het medium. Sommige recente methoden bevatten een fluorescerende stof zodat het tellen van de kolonies kan worden geautomatiseerd. Aan het einde van de incubatieperiode worden de kolonies op het oog geteld, een procedure die enkele ogenblikken in beslag neemt en waarvoor geen microscoop nodig is, aangezien de kolonies meestal een diameter van enkele millimeters hebben.
De gietplaatmethode wordt gebruikt wanneer bij de analyse wordt gezocht naar bacteriesoorten die slecht groeien in lucht. De eerste analyse wordt verricht door het mengen van seriële verdunningen van het monster in vloeibare voedingsstof-agar, die vervolgens in flessen wordt gegoten. De flessen worden vervolgens verzegeld en op hun kant gelegd om een hellend agaroppervlak te verkrijgen. De kolonies die zich in het medium ontwikkelen, kunnen na incubatie op het oog worden geteld. Het totale aantal kolonies wordt de Total Viable Count (TVC) genoemd. De meeteenheid is kve/ml (of kolonievormende eenheden per milliliter) en heeft betrekking op het oorspronkelijke monster. De berekening hiervan is een veelvoud van het getelde aantal kolonies vermenigvuldigd met de gebruikte verdunning. Voorbeelden van een telling van levensvatbare cellen zijn spread plates van een seriële verdunning van een vloeibare cultuur en pour plates. Met een spread plate maakt men seriële verdunningen in vloeibare media en vervolgens verspreidt men een bekend volume uit de laatste buis in de verdunningsreeks. De kolonies op de plaat kunnen dan worden geteld en de concentratie bacteriën in de oorspronkelijke cultuur kan worden berekend. Bij de gietplaatmethode wordt een verdund bacteriemonster vermengd met gesmolten agar en dat mengsel wordt vervolgens in een petrischaal gegoten. Ook hier worden de kolonies geteld en wordt het aantal levensvatbare cellen berekend.