Biologie I Laboratoriumhandleiding

Dingen die je na dit practicum aan iemand anders zou moeten kunnen uitleggen:

• Compound
• Totale vergroting
• Binoculair
• Veldveld
• Diepte van focus
• Inversie fenomeen

Slideshow

Achtergronden

Veel organismen (bacteriën) en delen van organismen (cellen) die biologen bestuderen, zijn te klein om met het menselijk oog te kunnen worden gezien. Wij gebruiken microscopen om preparaten voor ons onderzoek te vergroten. Het woord microscoop betekent “klein zien” en de eerste primitieve microscoop werd in 1595 vervaardigd.

Er zijn verschillende soorten microscopen, maar u zult vooral een samengestelde lichtmicroscoop gebruiken. Dit type microscoop maakt gebruik van zichtbaar licht dat door twee lenzen, het oculair en het objectief, wordt gebundeld om een klein preparaat te bekijken. Alleen cellen die dun genoeg zijn om licht door te laten, zullen met een lichtmicroscoop zichtbaar zijn in een tweedimensionaal beeld.

Een andere microscoop die je in het laboratorium zult gebruiken, is een stereoscopische of een dissectiemicroscoop. Dit type microscoop maakt gebruik van zichtbaar licht om dikkere, grotere preparaten, zoals een insect, in 3D te bekijken. Omdat u grotere preparaten bekijkt, is het vergrotingsbereik van de dissectiemicroscoop kleiner dan dat van de samengestelde lichtmicroscoop.

Uw instructeur zal de onderdelen en functies van de samengestelde lichtmicroscopen die we in de loop van het semester zullen gebruiken, bespreken. Vul de tabel op de volgende bladzijde in om je te helpen deze belangrijke informatie te onthouden. Je zult waarschijnlijk nog vaak naar deze pagina terugverwijzen. Hier is een plaatje van een lichtmicroscoop om te labelen en aantekeningen te maken.

onderdeel van microscoop	functie
oculairen (oculairen)
arm
draaibaar neusstuk
Stage
Objectieven
Slide clips
Stage bedieningsknop
Condensor
Irisdiafragma
Substage lamp (Illuminator)
Ruwafstelling
Fijnafstelling
Basis

Regels en instructies voor het gebruik van de samengestelde lichtmicroscopen

Uw instructeur zal het gebruik van de microscoop met uw klas bespreken. De juiste stappen om correct scherp te stellen zullen worden besproken. U dient de stap-voor-stap volgorde te volgen zoals uw instructeur aangeeft. Ook als u bekend bent met dit type microscoop, wordt van u verwacht dat u samen met de rest van de klas het scherpstellen doorneemt.

1. Belangrijke algemene regels:
   1. Draag de microscoop altijd met 2 handen – plaats een hand op de arm van de microscoop en de andere hand onder de voet van de microscoop.
   2. Raak de objectieflenzen (d.w.z. de uiteinden van de objectieven) niet aan.
   3. Houd de objectieven in de scanstand en houd de tafel laag bij het toevoegen of verwijderen van objectglaasjes.
   4. Bekijk de microscoop altijd van opzij wanneer u grote veranderingen in de hoogte van de tafel aanbrengt.
   5. De objectieflenzen mogen alleen worden gereinigd met speciaal lenspapier en lenzenreinigingsvloeistof.
   6. Speel GEEN handje-papiertje-er mag geen microscoop uit elkaar worden gehaald. Meld storingen aan uw docent.
2. Om een microscoop uit de laboratoriumkast te halen:
   1. Maak eerst ruimte vrij op tafel voor microscoop-vermijd een overvolle werkruimte.
   2. De microscopen zijn genummerd volgens de plaats waar u zit. Zoek het nummer onder uw tafel en gebruik de corresponderende microscoop.
   3. Draag de microscoop met TWEE handen.
   4. Zorg voor het netsnoer- laat het niet van de tafel afhangen!
3. Als u de microscoop terugplaatst in de laboratoriumkast:
   1. Laat de tafel zakken.
   2. Roteer het scanobjectief in positie over de scantafel.
   3. Haal uw objectglaasje van de scantafel.
   4. Reinig het objectglaasje en objectief met de speciale reinigingsvloeistof voor objectieven en het bijgeleverde papier.
   5. Center de scantafel zodat deze niet te ver naar weerszijden uitsteekt.
   6. Borg het snoer op door het onder de scantafel van de microscoop te wikkelen.
   7. Vervang de stofkap.
   8. Draag de microscoop met TWEE handen.
   9. Retourneer de microscoop in dezelfde houder waaruit u hem hebt verkregen en zorg ervoor dat u hem in de arm uitsteekt.
4. Om de microscoop scherp te stellen:
   Kijk vanaf de zijkant naar de microscoop:
   1. Laag de tafel tot aan de aanslag.
      1. Draai de objectieven zo dat het scan objectief naar beneden op de tafel wijst.
      2. Stel de tafel zo af dat het diafragma (de opening in het midden van de tafel) gecentreerd is.
      3. Plaats uw objectglaasje op de tafel en gebruik de podiumklem om het vast te zetten. De klem beweegt alleen in het horizontale vlak van de tafel, en hij zet de dia vast door nog net de rechter onderhoek van de dia te raken.
      4. Center het preparaat op uw dia onder het objectief door de tafel te bewegen.
      5. Verplaats de tafel tot bijna aan de aanslag, en zorg ervoor dat de dia de objectieflens niet raakt – kijk van opzij, zodat u kunt zien hoe hoog u de tafel moet zetten.
   2. Kijk door de oculairen:
      1. Gebruik de grove instelknop om de bühne naar beneden te bewegen tot het preparaat scherp is en verscherp dan de scherpstelling.
      2. Center het preparaat in het microscoopveld door de bühne te bewegen.
   3. Kijk van opzij naar de microscoop:
      1. Draai het laagvermogen (10X) objectief langzaam in positie.
   4. Kijk door de oculairen:
      1. Verscherp de scherpstelling, indien nodig, met de grove instelknop. Meestal is slechts een minimale bijstelling nodig.
      2. Center het preparaat in het veld, indien nodig.
   5. Kijk van opzij naar de microscoop:
      1. Roteer het hoog-vermogen objectief heel voorzichtig op zijn plaats!
   6. Kijk door de oculairen:
      1. Gebruik alleen de fijnregelknop om de scherpstelling te verscherpen. Hercentreer indien nodig. (Als uw preparaat “verdwenen” is, ga dan onmiddellijk terug naar laag vermogen en centreer het preparaat opnieuw.)
      2. Wanneer u een objectglaasje verwijdert, zet dan altijd eerst de objectieven terug in de scan-positie en laat de tafel zakken voordat u het objectglaasje weghaalt!

   Deel 1: Totale vergroting

   Vergroting is de verhouding tussen de beeldgrootte met de microscoop en de werkelijke grootte van het object. Wanneer u zegt dat de vergroting 10 is, is het beeld dat u met de microscoop ziet tien keer zo groot als wanneer u het preparaat met het blote oog bekijkt. Vergeet niet dat u bij een samengestelde lichtmicroscoop met twee lenzen vergroot, dus om de totale vergroting te berekenen moet u de objectiefvergroting vermenigvuldigen met de oculairvergroting. Bekijk de microscoop en gebruik de onderstaande tabel om de totale vergroting voor elk objectief te berekenen:

   	Objectieflens	Oculairlens	= Totale vergroting
   Scanobjectief
   Laag Objectief
   Hoog Objectief

   Deel 2: Inversiefenomeen

   Beschik over een letter “e”-dia die in de klas beschikbaar is. Bekijk het objectglaasje met uw ogen en plaats het vervolgens op de microscoop. Gebruik de scherpstelvolgorde om het objectglaasje onder laag vermogen te bekijken.

   Procedure

   1. Teken de letter “e” zoals die verschijnt als je het glaasje zonder de microscoop bekijkt.
   2. Teken de letter “e” zoals die verschijnt als je het glaasje onder de microscoop bekijkt.
   3. Verplaats je glaasje naar rechts met behulp van de mechanische toneelhefboom terwijl je door de oculairen kijkt. Welke kant beweegt de “e” op?
   4. Verplaats het objectglaasje van u af met de hendel van de mechanische tafel, terwijl u door de oculairen kijkt. Welke kant beweegt de “e” op?

   Vertel het verschijnsel inversie in uw eigen woorden.

   Deel 3: Gezichtsveld

   Het gezichtsveld is de hoeveelheid van het preparaat dat u ziet als u door de objectieven kijkt. Het gezichtsveld wordt kleiner bij hogere vergrotingen.

   Procedure

   Plaats een blauwe plastic liniaal over het diafragma van de tafel zodat de rand van de liniaal zichtbaar is als een verticale lijn langs de velddiameter. Schat de veldgrootte in millimeters voor elk van de objectieven.

   Scan __________ Laag (10X) __________ Hoog (40X) __________

   Deel 4: Diepte van de focus

   De diepte van de focus is de dikte van het specimen dat in focus blijft bij een bepaalde vergroting. De scherptediepte neemt af bij hogere vergrotingen.

   Procedure

   Krijg een gekleurde draaddia, en bekijk deze onder scan of laag vermogen. Bepaal dan welke kleur draad is:

   • Aan de bovenkant
   • In het midden
   • Aan de onderkant

   Hint: met behulp van de instructies voor het scherpstellen, focus op het gebied waar de drie draden elkaar kruisen. Gebruik de fijne focus om de volgorde van de draden te onderscheiden.

   Deel 5: Een nat preparaat maken

   In de loop van het semester wordt van u verwacht dat u een aantal eenvoudige preparaten maakt, “natte preparaten” genoemd. Het te bestuderen specimen wordt op een schoon objectglaasje geplaatst, een paar druppels water worden toegevoegd, en een dekglaasje wordt zorgvuldig over het water en het specimen geplaatst. Uw instructeur zal deze techniek demonstreren.

   Maak een nat preparaat van vijverwater volgens de onderstaande procedure:

   1. Plaats een druppel vijverwater op een schoon glasplaatje met behulp van de plastic wegwerppipet.
   2. Bedek het vijverwater op het objectglaasje met een dekglaasje. Probeer het dekglaasje schuin te plaatsen om luchtbellen te voorkomen.
   3. Veeg overtollige vloeistof op uw glaasje weg.
   4. Plaats het glaasje op de microscoop om het preparaat te observeren.
      1. Start op het scan objectief
      2. Voorzichtig overschakelen naar de lage en hoge objectieven als dat nodig is.

      Hopulair zult u wat levende organismen in uw vijverwater zien. Als u groen materiaal ziet, is het waarschijnlijk een soort plant. Kijk of er iets beweegt. Beschrijf in de ruimte hieronder wat je onder de microscoop waarneemt en maak er een eenvoudige tekening van.

      Deel 6: Stereoscopische dissectiemicroscoop

      Jouw instructeur zal het juiste gebruik van de dissectiemicroscoop demonstreren. Deze microscopen geven over het algemeen een lagere vergroting dan de samengestelde microscoop die u gebruikt.

      Procedure

      Bekijk de preparaten die beschikbaar zijn op de labtafel met behulp van de dissectiemicroscoop. Merk op dat de microscoop twee lichtbronnen heeft, een van de basis en een van boven. De preparaten zijn niet altijd op een objectglaasje gemonteerd. Merk ook op dat wanneer je voorwerpen onder de ontleedmicroscoop bekijkt, ze driedimensionaal zijn.

      Labvragen

      1. Lijst twee manieren waarop een stereoscopische ontleedmicroscoop verschilt van een samengestelde microscoop.
      2. Welke microscoop, de samengestelde lichtmicroscoop of de ontleedmicroscoop, heeft een lagere vergroting?

      Schoonmaken en verzorgen van de microscoop

      1. Beschrijf hoe en waarmee je de lens van de microscoop moet schoonmaken.
      2. Lijst vier dingen die je moet doen als je klaar bent met de microscoop aan het eind van het practicum.