Braz J Med Biol Res, oktober 2003, Volume 36(10) 1447-1454
Het gen voor 5alfa-reductase type 1, maar niet type 2, komt tot expressie in anagene haren die geplukt zijn van het gebied rond de punt van de hoofdhuid van harige vrouwen en normale individuen
I.O. Oliveira1,2, C. Lhullier1, I.S. Brum1 en P.M. Spritzer1,3
1Departamento de Fisiologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil
2Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, RS, Brasil
3Unidade de Endocrinologia Ginecológica, Serviço de Endocrinologia, Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Porto Alegre, RS, Brasil
Abstract
Abstract 
Het doel van deze studie was het bepalen van de expressie van de genen voor type 1 (SDR5A1) en type 2 (SDR5A2) 5a-reductase isoenzymen in hoofdhuidharen geplukt van 33 harige patiënten (20 met polycysteus ovarium syndroom en 13 met idiopathisch hirsutisme) en deze te vergelijken met die van 10 mannen en 15 normale vrouwen. De expressie van SDR5A1 en SDR5A2 werd geschat door RT-PCR met gebruikmaking van het gen van het ubiquitair tot expressie gebrachte eiwit ß2-microglobuline als interne controle. De resultaten worden uitgedrukt in willekeurige eenheden ten opzichte van de absorptie van ß2-microglobuline (gemiddelde ± SEM). SDR5A2 expressie werd in deze studie in geen enkel haarmonster aangetoond. Er werden geen verschillen gevonden in SDR5A1 mRNA niveaus tussen mannen en normale vrouwen (0,78 ± 0,05 vs 0,74 ± 0,06, respectievelijk). De SDR5A1 genexpressie in de cellen van geplukt haar van de hoofdhuid van normale vrouwen (0,85 ± 0,04) en van vrouwen met polycysteus ovarium syndroom (0,78 ± 0,05) en idiopathisch hirsutisme (0,80 ± 0,06) was ook vergelijkbaar. Deze resultaten geven aan dat de expressie van het SDR5A1 gen in de folliculaire keratinocyten van het gebied rondom de hoofdhuid geen verband lijkt te houden met de verschillen in haargroei die worden waargenomen tussen normale mannen en vrouwen en hirsutistische patiënten. Verdere studies zijn nodig om de expressie van de 5a-reductase genen in andere folliculaire compartimenten van de hoofdhuid, zoals dermale papillen, en ook in haarfollikels van andere lichaamsplaatsen, te onderzoeken om het mechanisme van androgeenwerking op het haargroeiproces en gerelateerde ziekten op te helderen.
Trefwoorden: Haarfollikel, Hirsutisme, 5a-Reductase, Polycysteus ovariumsyndroom
Inleiding
Androgenen zijn de belangrijkste regulatoren van de menselijke haargroei en worden in verband gebracht met een van de belangrijkste klinische haargroeistoornissen, namelijk hirsutisme. Deze aandoening komt overeen met een overmatige groei van het lichaamshaar bij vrouwen met een mannelijk patroon van verdeling van het lichaamshaar. De aanwezigheid van hirsutisme kan wijzen op aandoeningen die gepaard gaan met een verhoogde androgeenafscheiding door de eierstokken en/of de bijnieren, zoals polycysteus ovariumsyndroom (PCOS), androgeenproducerende tumoren en niet-klassieke bijnierhyperplasie, of kan het gevolg zijn van perifere overgevoeligheid voor circulerende androgenen (idiopathisch hirsutisme, IH) (1-3). Hoewel deze aandoening over het algemeen niet levensbedreigend is, is ze voor patiënten zeer verontrustend en heeft ze een aanzienlijke negatieve psychosociale impact. Onderzoek naar de effecten van androgenen op haargroei in aanwezigheid van hirsutisme zou onze kennis van de menselijke haarfollikel biologie moeten verbeteren.
Het effect van alle actieve androgenen op doelcellen wordt gemedieerd door hun binding aan dezelfde nucleaire androgeenreceptor. Eerdere studies naar androgeen resistentie syndromen hebben het belang van de androgeen receptor voor androgeen-afhankelijke haargroei aangetoond (4-6). Meer recent werd een verhoogde androgeen bindingscapaciteit waargenomen in hoofdhuid haarcellen van kalende mannen (7). Tot nu toe is er echter geen consistent verschil gevonden in het aantal of de functie van de androgeenreceptor bij harige patiënten in vergelijking met normale personen (8,9).
Haarfollikels hebben autonome controle over het androgeenmetabolisme, waarbij ze de productie en afbraak van steroïdhormonen aanpassen aan de lokale behoeften (10). Onder normale omstandigheden speelt 5a-reductase een sleutelrol in de werking van androgenen op de haarfollikels, door testosteron om te zetten in het krachtiger androgeen dihydrotestosteron (11,12). Studies van moleculaire klonering hebben twee genen gekarakteriseerd die coderen voor de type 1 en type 2 5a-reductase isoenzymen (13,14). Het in de huid overheersende 5a-reductase iso-enzym is type 1 (SDR5A1) (15), dat voor 60% homoloog is met 5a-reductase type 2 (SDR5A2) dat kenmerkend is voor de prostaatklier (14). Een toename van de 5a-reductase activiteit werd aangetoond in genitale en schaamhaar huid fibroblasten van hirsute patiënten in vergelijking met de huid van normale vrouwen (8,16). Deze studies hebben een toename in 5a-reductase activiteit gerapporteerd, zelfs bij IH, die gekenmerkt wordt door de afwezigheid van verhoogde plasma androgeen niveaus (17). Bovendien komt in de schaamhuid van hirsutepatiënten dezelfde SDR5A1 isovorm tot expressie als in de schaamhuid van normale personen, terwijl SDR5A2 voornamelijk tot expressie komt in de genitale huid van zowel normale personen als hirsutepatiënten (18). De fysiologische rol van 5a-reductase isoenzymen is echter niet volledig begrepen en hun distributie in verschillende huidcompartimenten is nog onduidelijk. Sommige immunohistochemische en enzymactiviteitsstudies wijzen op een overheersende expressie van het SDR5A1-enzym in talgklieren, maar ook in zweetklieren, epidermale cellen, wortelschede- en dermale papillacellen van haarfollikels (19-21), terwijl SDR5A2 in deze compartimenten slechts in zeer geringe mate tot expressie komt. Andere studies hebben daarentegen een andere distributie van deze isoenzymen binnen de pilosebaceous eenheid aangetoond (22-24). Er lijkt een hogere distributie van SDR5A1 in haarfollikel compartimenten te zijn in vergelijking met SDR5A2. Bovendien, aangezien wortelschede keratinocyten een hoge expressie van het SDR5A1 gen vertonen, spelen zij waarschijnlijk een belangrijke rol in het androgeen metabolisme in haarfollikels.
Het doel van de huidige studie was om de expressie van de SDR5A1 en SDR5A2 genen in haarwortelschede cellen van het vertex gebied van de hoofdhuid van hirsute patiënten te beoordelen en te vergelijken met normale personen van beide geslachten.
Patiënten en methoden
Onderwerpen
De onderzoekspopulatie bestond uit vrouwen die voor hirsutisme werden geconsulteerd en die gedurende een periode van 6 maanden achtereenvolgens werden gezien op de afdeling Gynaecologische Endocrinologie van het Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Brazilië. Drieëndertig patiënten, in leeftijd variërend van 12 tot 42 jaar, werden geselecteerd voor de studie. Bij 20 patiënten werd PCOS vastgesteld en bij 13 IH. De diagnose PCOS was gebaseerd op de lichamelijke kenmerken van hyperandrogenisme, verstoorde menstruatiecycli, verhoogde serum luteïniserend hormoon (LH) spiegels of LH/follicle-stimulating hormone ratio, verhoogde spiegels van totaal testosteron en/of vrije androgeen index (FAI), echografisch bewijs van bilateraal vergrote polycysteuze eierstokken (25,26), en afwezigheid van ovariële of bijnier neoplasma of het syndroom van Cushing. IH werd gediagnosticeerd zoals eerder beschreven (27) bij hirsute patiënten met regelmatige ovulatoire cycli (luteale fase progesteron niveaus hoger dan 3,8 ng / ml), normale androgeen niveaus, en zonder enige bekende onderliggende ziekte.
Patiënten met laat ontstane (niet-klassieke) congenitale bijnierhyperplasie kwamen niet in aanmerking voor het onderzoek op grond van een hoge plasmaspiegel van 17-hydroxyprogesteron (>5 ng/ml) en/of de duidelijke stijging ervan na ACTH-stimulatie (>12 ng/ml) (28,29). Patiënten met hyperprolactinemie (serum prolactine niveaus hoger dan 20 µg/l bij twee verschillende gelegenheden) werden ook uitgesloten.
Vijftien normale vrouwen met regelmatige menstruele cycli in de leeftijd van 16-37 jaar en tien mannen in de leeftijd van 16-29 jaar werden ook geselecteerd voor het onderzoek, dat werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Van elke proefpersoon werd geïnformeerde toestemming verkregen. Geen van de proefpersonen had gedurende ten minste 3 maanden voor de studie geneesmiddelen gekregen waarvan bekend is dat ze de serumspiegels van androgeen, oestrogeen of gonadotrofine beïnvloeden.
SDR5A1 en SDR5A2 mRNA niveaus werden geschat door de omgekeerde transcriptie-polymerase kettingreactie (RT-PCR) in haarcellen geplukt van het vertex gedeelte van de hoofdhuid van normale mannen, normale vrouwen en hirsute patiënten.
Studieprotocol
Antropometrische metingen omvatten lichaamsgewicht, lengte en body mass index (BMI = huidig gemeten gewicht in kg gedeeld door lengte in m2). De hirsutismescore werd gegradeerd volgens de Ferriman-Gallwey-methode (30), waarbij het onderbeen en de onderarm werden uitgesloten.
De hormonale bepaling werd uitgevoerd tussen dag 2 en dag 10 van de menstruatiecyclus of op elke dag dat de patiënten amenorroïsch waren. Na een nacht vasten werden bloedmonsters genomen uit een antecubitale ader voor de bepaling van LH, sex hormone-binding globulin (SHBG) en totaal testosteron. Alle monsters werden tussen 8 en 10 uur ’s ochtends afgenomen. De FAI werd geschat door totaal testosteron (nmol/l) te delen door SHBG (nmol/l) x 100.
Assays
Totaal testosteron werd gemeten met een dubbel-antilichaam radio-immunoassay (ICN, Costa Mesa, CA, USA), met een assay-detectielimiet van 0.04 ng/ml en een intra- en interassay variantiecoëfficiënt (CV) van respectievelijk 10 en 15%; SHBG werd gemeten met een immunochemiluminometrische assay (ICMA; DPC, Los Angeles, CA, USA), met een detectielimiet van 0,2 nmol/l, en een intra- en interassay CV van respectievelijk 5,0 en 8,0%. LH werd gemeten door ICMA, met een detectiegrens van 0,7 mIU/ml en intra- en interassay CV van 5,2 en 8,0%, respectievelijk.
RT-PCR protocol
Geplukte anagene haren werden verzameld van de vertex van de hoofdhuid van alle proefpersonen en werden onmiddellijk ingevroren in vloeibare stikstof en naar het laboratorium vervoerd voor assays. De extractie van totaal RNA en de synthese van cDNA werden uitgevoerd zoals eerder beschreven (31). De geplukte haarwortels werden gehomogeniseerd in fenol-guanidine-isothiocyanaat (Trizol, Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA). Totaal RNA werd geëxtraheerd met chloroform en geprecipiteerd met isopropanol door 12.000 g centrifugeren bij 4ºC. De RNA pellet werd tweemaal gewassen met 75% ethanol, geresuspendeerd in diethylpyrocarbonaat-behandeld water, en gekwantificeerd door absorptie bij 260 nm.
Eerste streng cDNA werd gesynthetiseerd uit 5 µg totaal RNA voor alle reacties met behulp van het SuperScript Preamplification System (Gibco-BRL). Na denaturering van het template RNA en de primers bij 70 ºC gedurende 10 min, werd reverse transcriptase toegevoegd in aanwezigheid van 20 mM Tris-HCl, pH 8,4, plus 50 mM KCl, 2,5 mM MgCl2, 0,5 mM dNTP mix en 10 mM dithiothreitol, en geïncubeerd bij 42 ºC gedurende 55 min. Het mengsel werd verwarmd tot 70 ºC om de reactie te stoppen en vervolgens geïncubeerd met E. coli RNase gedurende 20 min bij 37 ºC om ongetranscribeerd RNA te vernietigen. Het in de verschillende PCR-tests gebruikte sjabloon (cDNA) werd verkregen uit dezelfde omgekeerde transcriptiereactie. De PCR werd uitgevoerd in een eindvolume van 50 µl. Twee microliter van de eerstestrengsynthesereactie (met een verwachte cDNA-opbrengst van 10 ng) werd gedenatureerd bij 94ºC gedurende 3 min (2 min alleen voor ß2-microglobuline) in aanwezigheid van 20 mM Tris-HCl, pH 8.4, plus 50 mM KCl en 1,5 mM MgCl2. Na deze warme start werd 1,25 U Taq DNA-polymerase toegevoegd, samen met dezelfde Tris-HCl-buffer, 1,5 mM MgCl2, 0,4 µM sense- en antisense-primers en 0,2 mM dNTP-mix.
Een 368-bp fragment van de SDR5A1 (24) en een 566-bp fragment van de SDR5A2 (14) cDNA-sequentie werden geamplificeerd met primers ontworpen om intron-exon grenzen overspannen om de amplificatie van eventuele verontreinigende genomische DNA te voorkomen. Een 623-bp cDNA-fragment dat overeenkomt met het ubiquitair tot expressie gebrachte eiwit ß2-microglobuline (32) werd geamplificeerd om de cDNA-bedragen in elk monster te normaliseren. De cDNA-sequenties van SDR5A1 en SDR5A2 en ß2-microglobuline primers zijn vermeld in tabel 1. De PCR werd gestandaardiseerd door een aantal cycli (20 tot 45) te testen en de amplificatie werd in het lineaire bereik uitgevoerd. De uiteindelijke PCR-condities waren als volgt: 35 cycli (45 s bij 94ºC, 45 s bij 60ºC, 90 s bij 72ºC, 10 min. bij 72ºC) voor SDR5A1, 40 cycli (1 min. bij 94ºC, 1 min. bij 65ºC, 2 min. bij 72ºC, 5 min. bij 72ºC) voor SDR5A2, en 30 cycli (1 min. bij 94ºC, 1 min. bij 55ºC, 1 min. bij 72ºC, 5 min. bij 72ºC) voor ß2-microglobuline. cDNA van gedissocieerde cellen van de menselijke prostaatklier werd gebruikt als positieve controle voor alle PCR-reacties. Aan de negatieve reacties werd geen cDNA toegevoegd. Een monster van het PCR-mengsel (15 µl) werd in grootte gefractioneerd op 1,5-2,0% agarosegel, gekleurd met ethidiumbromide, bij 100 V uitgevoerd en onder UV-licht gevisualiseerd. De verwachte banden werden gekwantificeerd door densitometrische analyse met behulp van een beeldverwerkingssysteem (ImageMaster VDS, Pharmacia Biotech, Uppsala, Zweden).
Statistische analyse
Gegevens worden gerapporteerd als gemiddelden ± SEM, tenzij anders vermeld. Groepsgemiddelden werden vergeleken door de Student t-test of door een eenwegs variantieanalyse (ANOVA) gevolgd door de Duncan test, en mediane waarden werden vergeleken door de Mann-Whitney test. Verschillen werden als statistisch significant beschouwd bij P < 0,05. Alle analyses werden uitgevoerd met behulp van de Statistical Packages for the Social Sciences (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA).
Resultaten
Tabel 2 geeft een overzicht van de antropometrische en hormonale gegevens voor patiënten met PCOS en IH. Er werden geen significante verschillen waargenomen tussen de twee groepen hirsutide patiënten met betrekking tot leeftijd of klinische score voor hirsutisme. Echter, hirsute patiënten met PCOS vertoonden een hogere BMI en significant hogere niveaus van testosteron, FAI en LH dan de IH groep. SHBG concentraties waren lager in de PCOS groep dan in de IH groep.
SDR5A2 genexpressie werd niet gedetecteerd in enige hoofdhuid haarmonsters geanalyseerd met RT-PCR in de huidige studie (figuur 1).
Figuur 2 toont SDR5A1 mRNA niveaus in haarcellen geplukt van de hoofdhuid van normale proefpersonen. De SDR5A1 expressie, gepresenteerd als arbitraire eenheden in verhouding tot de absorptie van ß2-microglobuline, was vergelijkbaar bij mannen (0,78 ± 0,05) en normale vrouwen (0,74 ± 0,06). Bovendien werden geen significante verschillen waargenomen in folliculaire keratinocyten SDR5A1 expressie tussen normale vrouwen (0,85 ± 0,04) en de PCOS (0,78 ± 0,04) of IH (0,80 ± 0,06) hirsute groepen (figuur 3).
|
|
Figuur 1. Representatieve agarose gel gekleurd met ethidium bromide tonen geen expressie van SDR5A2 mRNA door RT-PCR in haarcellen geplukt van de hoofdhuid van mannen (1 tot 9), normale vrouwen (10 tot 17) en hirsute patiënten: PCOS groep (18 tot 31) en IH groep (32 tot 39). Het fragment van 566 bp komt overeen met SDR5A2 (5a-R2) en het fragment van 623 bp komt overeen met ß2-microglobuline (ß2-m). SDR5A2 amplificatie werd alleen gevisualiseerd in gedissocieerde prostaatcellen gebruikt als positieve controle (+). |
|
|
Figuur 2. Representatieve gel met SDR5A1 mRNA niveaus bepaald door RT-PCR in haarcellen geplukt van de hoofdhuid van mannen (1 tot 7) en normale vrouwen (8 tot 14). De 368-bp fragment komt overeen met SDR5A1 (5a-R1) en de 623-bp fragment komt overeen met ß2-microglobuline (ß2-m). RT-PCR-producten werden gevisualiseerd op agarosegel gekleurd met ethidiumbromide. + = positieve controle. |
|
|
Figuur 3. Representatieve gel met SDR5A1 mRNA niveaus bepaald door RT-PCR in haarcellen geplukt van de hoofdhuid van normale vrouwen (1 tot 14) en van beide groepen van hirsute patiënten (PCOS: 15 tot 26; IH: 27 tot 35). Het 368-bp fragment komt overeen met SDR5A1 (5a-R1), en het 623-bp fragment met ß2-microglobuline (ß2-m). RT-PCR producten werden gevisualiseerd op agarose gel gekleurd met ethidium bromide. |
Discussie
Hoewel de activiteit van 5a-reductase in de huid in verband wordt gebracht met hirsutisme, moeten de specifieke rol en de identificatie van het isoenzym dat bij deze klinische haargroeiconditie betrokken is, nog beter worden gedefinieerd. In de huidige studie onderzochten we de mRNA expressie van beide typen 5a-reductase in geplukte anagene hoofdhuid haarcellen van hirsutiserende patiënten.
Het SDR5A1 gen kwam tot expressie in geplukte haarcellen verkregen uit de vertex van de hoofdhuid van normale proefpersonen. Andere studies hebben soortgelijke resultaten aangetoond, zelfs wanneer SDR5A1 mRNA werd onderzocht in gekweekte folliculaire keratinocyten (24,33). Geplukte anagene haren bestaan voornamelijk uit keratinocyte cellen die zowel buitenste als binnenste wortelscheden vormen. Het bindweefsel schede, de onderste bol, de dermale papilla cellen en de talgklier zijn afwezig in geplukt haar. Daarom bevestigen onze gegevens de genexpressie van SDR5A1 in folliculaire keratinocyten, en zijn in overeenstemming met anderen, die 5a-reductase immunoreactiviteit toonden in wortelschede cellen van haarfollikels (20,23).
In de huidige studie, SDR5A1 mRNA niveaus van geplukte hoofdhuid haren verschilden niet tussen normale mannen en vrouwen. Eerdere studies hebben ook een vergelijkbare 5a-reductase activiteit beschreven in haarfollikels van mannen en vrouwen (12,34). Daarentegen werd bij normale mannen een hogere 5a-reductase activiteit in schaamhuidmonsters gevonden dan bij normale vrouwen (1). Alles bij elkaar suggereren deze resultaten dat bij normale mensen de 5a-reductase regulatie lijkt te verschillen tussen folliculaire keratinocyten van de hoofdhuid en fibroblasten van de schaamhuid.
Hoofdhuid haarfollikelcellen lijken niet het belangrijkste doelwit van hirsutisme te zijn. Er zijn echter enkele ethische moeilijkheden bij het verkrijgen van monsters uit het gezicht van hirsutaire patiënten. Bovendien zijn er slechts weinig literatuur rapporten over de moleculaire mechanismen van hoofdhuid haarfollikelcellen in de aanwezigheid van hirsutisme (9). De hoofdhuid is een bekende androgeen-gevoelige plaats bij beide geslachten en het is relatief gemakkelijk om een monster van hoofdhuidharen te verkrijgen. Daarom is het interessant om enkele aspecten van het androgeen metabolisme in geplukte haarcellen van de hoofdhuid te onderzoeken, vooral wanneer het mogelijk is om personen te vergelijken met een endogene blootstelling aan hogere (PCOS) of normale (IH) circulerende androgeen niveaus.
We hebben geen verschillen in SDR5A1 mRNA niveaus in de folliculaire keratinocyten waargenomen, noch tussen hirsutische patiënten en normale vrouwen, noch tussen normale mannen en vrouwen. Bovendien vertoonden patiënten met hoge serum androgeenspiegels (PCOS groep) dezelfde SDR5A1 genexpressie als die met IH en normale androgeenspiegels. Hoewel SDR5A1 het isoenzym is dat overheerst in de huid (14), geven de huidige resultaten aan dat circulerende androgenen waarschijnlijk niet bijdragen aan de SDR5A1 genexpressie in de hoofdhuid folliculaire keratinocyten, wat suggereert dat SDR5A1 niet het belangrijkste isoenzym is in het lokale androgeenmetabolisme van de hoofdhuid. Anderzijds is de werkzaamheid van de 5a-reductase remmer finasteride bij de behandeling van haaruitval bij mannen (35), alsook bij IH aangetoond (36,37). Finasteride is een oraal actieve remmer die bij voorkeur 5a-reductase type 2 blokkeert, maar ook het iso-enzym type 1 kan remmen, waardoor een duidelijke daling van de dihydrotestosteron- en 3a-androstenediol glucuronide-spiegels wordt veroorzaakt. Het heeft geen affiniteit voor de androgeenreceptor en heeft geen androgene, oestrogene, progestationele of andere steroïde effecten (38). In overeenstemming met onze resultaten, gaven deze studies aan dat 5a-reductase type 2 waarschijnlijk een meer kritische rol heeft in het haargroeiproces en gerelateerde klinische condities.
De huidige resultaten tonen aan dat het SDR5A2 gen niet tot expressie kwam in de folliculaire keratinocyten van welk subject dan ook, mannen of normale vrouwen of hirsute patiënten. Eerdere studies hebben de preferentiële lokalisatie van SDR5A2 mRNA en enzymactiviteit (39,40) in de dermale papilla cellen beschreven, hoewel SDR5A2 immunoreactiviteit ook werd gevonden in de keratinocyten van de haarfollikel (20,22). De schijnbare discrepanties in eiwitexpressie tussen deze studies kunnen, althans gedeeltelijk, verklaard worden door de verschillende methoden van immunohistochemische analyse van kwalitatieve gegevens. Wat betreft de afwezigheid van SDR5A2 genexpressie, beschreven in de huidige studie, meer gevoelige methoden van genexpressie analyse, bijvoorbeeld real-time PCR, zal deze vraag mogelijk op te helderen in de toekomst.
We hebben niet onderzocht de genexpressie van 5a-reductase isoenzymen in andere folliculaire compartimenten zoals dermaal papillae omdat deze cellen niet aanwezig zijn in geplukte geïsoleerde haren. De dermale papillae cellen worden alleen verkregen door excisie biopsie, wat een invasieve en belastende methode is. Het zal echter zeer interessant zijn om 5a-reductase isoenzymen te onderzoeken in de dermale papilla cellen van hirsute patiënten, omdat is gesuggereerd dat deze cellen het directe doelwit kunnen zijn van androgenen in haarfollikels, die de activiteit van de haarmatrix, melanocyten en keratinocyten reguleren met paracriene signalen (10).
SDR5A1 genexpressie in de folliculaire keratinocyten van het vertex gebied van de hoofdhuid lijkt niet gerelateerd te zijn aan verschillen in haargroei waargenomen tussen normale mannen en vrouwen en hirsute patiënten. Meer onderzoek naar de regulatie van 5a-reductase genexpressie in haarfollikelcellen op verschillende lichaamsplaatsen kan helpen om het intrigerende mechanisme van androgeenwerking op het haargroeiproces en daarmee samenhangende ziekten op te helderen.
1. Kuttenn F, Mowszowicz I, Schaison G & Mauvais-Jarvis P (1977). Androgeenproductie en huidmetabolisme bij hirsutisme. Tijdschrift voor Endocrinologie, 75: 83-91.
2. New MI, Lorenzen F, Lerner AJ et al. (1983). Genotypering steroid 21 hydroxylase deficiëntie: hormonale referentiegegevens. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 57: 320-326.
3. Azziz R, Carmina E & Sawaya ME (2000). Idiopathic hirsutism. Endocrine Reviews, 21: 347-362.
4. Mauvais-Jarvis P, Bercovici JP & Gauthier F (1969). In vivo studies over het testosteronmetabolisme door de huid van normale mannen en patiënten met het syndroom van testiculaire feminisatie. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 29: 417-421.
5. Griffin JE & Wilson JD (1977). Studies on the pathogenesis of the incomplete forms of androgen resistance in man. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 45: 1137-1143.
6. Kuttenn F, Mowszowicz I, Wright F, Baudot N, Jaffiol C, Robin M & Mauvais-Jarvis P (1979). Mannelijk pseudohermaphroditisme: een vergelijkende studie van één geval van 5a-reductase-deficiëntie met drie volledige vormen van testiculaire feminisatie. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 49: 861-865.
7. Hibberts NA, Howell AE & Randall VA (1998). Balding hair follicle dermal papilla cells contain higher levels of androgen receptors than those from non-balding scalp. Journal of Endocrinology, 156: 59-65.
8. Mowszowicz I, Melanitou E, Doukani A, Wright F, Kuttenn F & Mauvais-Jarvis P (1983). Androgen binding capacity and 5-reductase activity in pubic skin fibroblasts from hirsute patients. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 56: 1209-1213.
9. Oliveira IO, Lhullier C, Brum IS & Spritzer PM (2003). Gene expression of type 2 17ß hydroxysteroid dehydrogenase in scalp hairs of hirsute women. Steroïden (in druk).
10. Randall VA (1994). Androgenen en menselijke haargroei. Clinical Endocrinology, 40: 439-457.
11. Hay JB & Hodgins MB (1973). Metabolism of androgens in vitro by human facial and axillary skin. Tijdschrift voor Endocrinologie, 59: 475-486.
12. Takayasu S, Wakimoto H, Itami S & Sano S (1980). Activiteit van testosteron 5a-reductase in verschillende weefsels van de menselijke huid. Journal of Investigative Dermatology, 74: 187-191.
13. Andersson S, Bischop RW & Russell DW (1989). Expression, cloning and regulation of steroid 5a-reductase, an enzyme essential for male sexual differentiation. Journal of Biological Chemistry, 264: 16249-16255.
14. Andersson S, Berman DM, Jenkins EP & Russell DW (1991). Deletie van steroid 5a-reductase 2 gen in mannelijk pseudohermaphroditisme. Nature, 354: 159-161.
15. Harris G, Azzolina B, Baginsky W, Cimis G, Rasmusson G, Tolman R, Raetz C & Ellsworth K (1992). Identification and selective inhibition of an isoenzyme of steroid 5a-reductase in human scalp. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 89: 10787-10791.
16. Lobo RA, Goebelsmann U & Horton R (1983). Evidence for the importance of peripheral tissue events in the development of hirsutism in polycystic ovary syndrome. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 57: 393-397.
17. Serafini P & Lobo RA (1985). Increased 5-reductase activity in idiopathic hirsutism. Vruchtbaarheid en Steriliteit, 43: 74-78.
18. Mestayer CH, Berthaut I, Portois M-C, Wright F, Kuttenn F, Mowszowicz I & Mauvais-Jarvis P (1996). Overheersende expressie van 5a-reductase type 1 in de schaamhuid van normale proefpersonen en harige patiënten. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 81: 1989-1993.
19. Luu-The V, Sugimoto Y, Puy L, Labrie Y, Solache IL, Singh M & Labrie F (1994). Characterization, expression, and immunohistochemical localization of 5a-reductase in human skin. Journal of Investigative Dermatology, 102: 221-226.
20. Eicheler W, Dreher M, Hoffmann R, Happle R & Aumüller G (1995). Immunohistochemical evidence for differential distribution of 5a-reductase isoenzymes in human skin. British Journal of Dermatology, 133: 371-376.
21. Chen W, Zouboulis CC, Fritsch M, Blume-Peytavi U, Kodelja V, Goerdt S, Luu-The V & Orfanos CE (1998). Evidence of heterogeneity and quantitative differences of the type 1 5a-reductase expression in cultured human skin cells: evidence of its presence in melanocytes. Journal of Investigative Dermatology, 110: 84-89.
22. Bayne EK, Flanagan J, Einstein M et al. (1999). Immunohistochemical localization of types 1 and 2 5a-reductase in human scalp. British Journal of Dermatology, 141: 481-491.
23. Sawaya ME & Price VH (1997). Different levels of 5a-reductase type I and II, aromatase, and androgen receptor in hair follicles of women and men with androgenetic alopecia. Journal of Investigative Dermatology, 109: 296-300.
24. Courchay G, Boyera N, Bernard BA & Mahe Y (1996). Messenger RNA expression of steroidogenesis enzyme subtypes in the human pilosebaceous unit. Skin Pharmacology, 9: 169-176.
25. Adams J, Franks S, Polson DW, Mason HD, Abdulwahid N, Tucker M, Morris DV, Price J & Jacobs HC (1985). Multifollicular ovaries: clinical and endocrine features and response to pulsatile gonadotropin releasing hormone. Lancet, 2: 1375-1379.
26. Herter LD, Magalhães JA & Spritzer PM (1996). Relevantie van de bepaling van het ovariële volume bij adolescente meisjes met menstruatiestoornissen. Tijdschrift voor Klinische Echografie, 24: 243-248.
27. Spritzer PM, Oppermann-Lisboa K, Mattiello S & Lhullier F (2000). Use of spironolactone as a single agent for long-term therapy of hirsute patients. Klinische endocrinologie, 52: 587-594.
28. Spritzer PM, Billaud L, Thalabard J, Kuttenn F & Mauvais-Jarvis P (1990). Cyproteronacetaat versus hydrocortison behandeling bij late onset bijnier hyperplasie. Tijdschrift voor Klinische Endocrinologie en Metabolisme, 70: 642-645.
29. Azziz R, Dewailly D & Owerbach D (1994). Non-classic adrenal hyperplasia: current concepts. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 78: 810-815.
30. Ferriman D & Gallwey JD (1961). Clinical assessment of body hair growth in women. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 21: 1140-1148.
31. Reis FM, Maia AL, Ribeiro MFM & Spritzer PM (1999). Progestin modulation of c-fos and prolactin gene expression in the human endometrium. Fertility and Sterility, 71: 1125-1132.
32. Taplin ME, Bubley GJ, Shuster TD, Frantz ME, Spooner AE, Ogata GK, Keer HN & Balk SP (1995). Mutation of the androgen-receptor gene in metastatic androgen-independent prostate cancer. New England Journal of Medicine, 332: 1393-1398.
33. Eicheler W, Huth A, Happle R & Hoffmann R (1996). RNA-levels of 5a-reductase androgen receptor in human skin, hair follicles and follicle-derived cells. In: Van Neste DJJ & Randall VA (editors), Hair Research for the Next Millenium. Elsevier Science, Amsterdam, 327-331.
34. Schweikert HU & Wilson JD (1974). Regeling van de menselijke haargroei door steroïdhormonen. I. Testosteron metabolisme in geïsoleerde haren. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 38: 811-819.
35. Kaufman KD, Olsen EA, Whiting D et al. (1998). Finasteride bij de behandeling van mannen met alopecia androgenetica. Finasteride Male Pattern Hair Loss Study Group. Journal of the American Academy of Dermatology, 39: 578-589.
36. Tartagni M, Schonauer LM, De Salvia MA, Cicinelli E, De Pergola G & D’Addario V (2000). Vergelijking van Diane 35 en Diane 35 plus finasteride bij de behandeling van hirsutisme. Fertility and Sterility, 73: 718-723.
37. Sahin Y, Diller S & Kelestimur F (2001). Vergelijking van Diane 35 en Diane 35 plus finasteride bij de behandeling van hirsutisme. Fertility and Sterility, 75: 496-500.
38. Rittmaster RS (1994). Finasteride. New England Journal of Medicine, 330: 120-125.
39. Asada Y, Sonoda T, Ojiro M, Kurata S, Sato T, Ezaki T & Takayasu S (2001). 5a-Reductase type 2 komt constitutief tot expressie in de dermale papil en bindweefselschede van de haarfollikel in vivo maar niet tijdens kweek in vitro. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86: 2875-2880.
40. Eicheler W, Happle R & Hoffmann R (1998). 5a-Reductase activity in the human hair follicle concentrates in the dermal papilla. Archief van Dermatologisch Onderzoek, 290: 126-132.