Isolation of Malassezia furfur from a Cat

Het geslacht Malassezia bestaat uit lipofiele gisten waarvan bekend is dat ze deel uitmaken van de microflora van de menselijke huid en van veel zoogdieren en vogels, en die zelden uit het milieu worden geïsoleerd (11). Deze gisten hebben de typische fysiologische eigenschap lipiden als koolstofbron te gebruiken. Met uitzondering van Malassezia pachydermatis hebben de overige soorten van het geslacht Malassezia supplementatie met lange-keten (C12 tot C24) vetzuren nodig voor in vitro groei. De taxonomie van deze gisten is altijd omstreden geweest (8). Enkele jaren geleden waren de aanvaarde soorten M. furfur (Robin) Baillon 1889 en M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Onlangs werd het genus herzien op basis van moleculaire gegevens en lipidenvereisten en werd het uitgebreid tot zeven soorten: M. furfur,M. pachydermatis, M. sympodialis,M. globosa, M. obtusa, M. restricta, en M. slooffiae (4).

M. furfur is een bekende opportunistische cutane ziekteverwekker van de mens. Het is de veroorzaker van pityriasis versicolor, pityriasis capitis, seborrheïsche dermatitis en folliculitis. Malassezia species worden echter steeds belangrijker als opkomende ziekteverwekker, omdat ze systemische infecties kunnen veroorzaken bij immuungecompromitteerde patiënten en bij pasgeborenen die intraveneuze lipiden toegediend krijgen (1, 12). Het doel van dit onderzoek was om de lipofiele microbiota van de uitwendige gehoorgangen van katten zonder otitis externa te bestuderen. In dit artikel wordt de eerste isolatie van M. furfur bij een kat beschreven.

De uitwendige gehoorgangen van 33 huiskatten (17 katers en 16 poezen) zonder otitis externa werden bemonsterd met behulp van een swab. De monsters werden gekweekt op Sabouraud glucose agar (SGA; Biolife s.r.l., Milaan, Italië), SGA aangevuld met olijfolie (10 ml/liter), en Leeming’s medium (10 g pepton, 5 g glucose, 0,1 g gistextract, 4 g gedesiccineerde ossengal, 1 ml glycerol, 0,5 g glycerolmonostearaat, 0,5 ml Tween 60, 10 ml volle koemelk, 12 g agar per liter, pH 6,2) (9). Alle media bevatten 0,05% chlooramfenicol en 0,05% cycloheximide. Elke uitstrijkje van cerumen werd gefixeerd door verhitting, gekleurd met Diff-Quick, en microscopisch onderzocht op de aanwezigheid van typische Malassezia-cellen. De platen werden geïncubeerd bij 35°C en onderzocht na 3, 5, 7 en 14 dagen. Wanneer groei werd waargenomen, werden vijf verschillende kolonies geselecteerd uit het SGA aangevuld met olijfolie en uit het Leeming’s medium en op SGA gekweekt om hun lipide-afhankelijkheid te bepalen. M. pachydermatis werd geïdentificeerd aan de hand van de microscopische morfologie en het vermogen om op SGA te groeien. De identificatie van de lipide-afhankelijke gisten was gebaseerd op de Tween diffusie test voorgesteld door Guillot et al. (7), de Cremophor EL assimilatie test, en de splitsing van esculine beschreven door Mayser et al. (10), en de volgende type stammen werden gebruikt als controles: M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (waarbij NT staat voor neotype), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T, en M. obtusa CBS 7876T (vriendelijk ter beschikking gesteld door E. Guého en J. Guillot). Met de Tween-diffusietest kan onderscheid worden gemaakt tussen lipide-afhankelijke soorten op basis van hun vermogen om verschillende polyoxyethyleensorbitaanesters (Tweens 20, 40, 60 en 80) te assimileren. Cremophor EL bevat ricinolzuur en ricinolzuur en wordt gebruikt als een aanvullend sleutelkenmerk voor de differentiatie van de soorten M. furfur, M. slooffiae, en M. sympodialis.

Typische Malassezia-cellen waren duidelijk in Diff-Quick-gekleurde uitstrijkjes van cerumen van zeven katten, maar slechts vijf van deze monsters werden positief gekweekt. Malassezia soorten werden geïsoleerd bij zeven katten (21,2%), maar in twee Diff-Quick-uitstrijkjes van deze katten werden de typische Malassezia cellen niet gedetecteerd. Gisten behorend tot andere soorten werden niet geïsoleerd. Bij zes katten (18,1%) werd alleen M. pachydermatis geïsoleerd gedurende de eerste week van incubatie (drie isolaten werden gekweekt na 3 dagen, twee na 5 dagen, en één na 7 dagen). Van één kat werd na 7 dagen incubatie alleen een lipide-afhankelijke soort geïsoleerd. Dit isolaat vormde crèmekleurige, gladde en umbonate kolonies met een gemiddelde diameter van 4,3 mm op gemodificeerde Dixon-agar (36 g moutextract, 6 g pepton, 20 g gedehydrateerde ossengal, 10 ml Tween 40, 2 ml glycerol, 2 ml oliezuur, 12 g agar per liter, pH 6,0) (4) na 7 dagen incubatie bij 32°C. De textuur was brokkelig, en de cellen waren eivormig tot bolvormig (1,5 tot 3,0 μm bij 1,5 tot 4 μm). Er werden knoppen gevormd op een brede basis, en in sommige cellen werden korte filamenten gezien. De catalase reactie was positief. Dit isolaat gebruikte de vier Tweens (20, 40, 60 en 80), assimileerde Cremophor EL, en was zwak positief voor esculinesplitsing, net als de typestammen M. furfur CBS 1878T en M. furfur CBS 7019NT (Fig.1). Op grond van deze bevindingen werd deze lipide-afhankelijke gist geïdentificeerd als M. furfur(7, 10).