Abstract
Kandydoza jamy ustnej jest wywoływana przez grzyby z rodzaju Candida i jest jedną z najczęstszych oportunistycznych infekcji grzybiczych jamy ustnej człowieka. Biorąc pod uwagę zmienność kliniczną tej choroby, techniki mikrobiologiczne są często wymagane do potwierdzenia klinicznego, jak również do ustalenia rozpoznania różnicowego z innymi chorobami. Celem tego krótkiego raportu technicznego jest zilustrowanie prostej metody, która może zapewnić natychmiastową diagnostykę mikroskopową tej choroby. Przedstawiamy przypadek 14-letniego chłopca cierpiącego na rumieniowe zapalenie jamy ustnej związane z protezą zębową, zdiagnozowanego i obserwowanego przy użyciu uproszczonej techniki mikroskopii bezpośredniej. Umożliwia ona dokładną diagnozę za pomocą nieinwazyjnej i bezbolesnej metody pobierania próbek, powiązanej z wynikami badań laboratoryjnych.
1. Wprowadzenie
Kandydoza jamy ustnej jest wywoływana przez grzyby z rodzaju Candida i jest jedną z najczęstszych oportunistycznych infekcji grzybiczych jamy ustnej człowieka. Sto pięćdziesiąt gatunków tego rodzaju zostało wyizolowanych w jamie ustnej, z czego 80% odpowiada Candida albicans . Zakażenie kandydozą jamy ustnej może mieć charakter ostry lub przewlekły i być klasyfikowane jako rzekomobłoniaste lub rumieniowe. Kandydoza jamy ustnej jest jedną z najczęstszych chorób błony śluzowej, ponieważ występują w niej wszystkie typy infekcji. Zwiększona częstość występowania infekcji może być związana z różnymi czynnikami predysponującymi, takimi jak długotrwała antybiotykoterapia, niedożywienie, zaburzenia endokrynologiczne, zakażenie wirusem HIV, kserostomia, palenie tytoniu, niewłaściwa higiena jamy ustnej oraz stosowanie protez zębowych. Zazwyczaj rozpoznanie kandydozy jamy ustnej opiera się na objawach klinicznych i zwykle jest proste w przypadku ostrej kandydozy rzekomobłoniastej, zwłaszcza u niemowląt. Jednakże, biorąc pod uwagę zmienność kliniczną tej choroby, często wymagane jest zastosowanie technik mikrobiologicznych w celu potwierdzenia klinicznego, jak również ustalenia rozpoznania różnicowego z innymi chorobami. Ponadto, w przypadkach charakteryzujących się opornością na leki przeciwgrzybicze, szczególnie u pacjentów przewlekle chorych, korzystne może być wykonanie dodatkowego badania mikrobiologicznego. Do izolacji i identyfikacji Candida species stosuje się obecnie kilka metod, w tym bezpośrednią mikroskopię rozmazów, barwienia, hodowle oraz metody genetyczne (PCR). Badane są również nowe metody identyfikacji, które mają zapewnić szybkie i dokładne wykrywanie. Ostatni przegląd literatury wykazał zalety mikroskopii bezpośredniej w diagnostyce kandydozy jamy ustnej u dzieci i młodzieży. Celem tego krótkiego raportu technicznego jest zilustrowanie prostej metody przy fotelu, która może zapewnić natychmiastową diagnostykę mikroskopową tej choroby.
2. Opis przypadku
Aby zilustrować tę metodę, przedstawiamy przypadek 14-letniego chłopca cierpiącego na zapalenie jamy ustnej związane z protezą (Rycina 1). Zapalenie jamy ustnej związane z protezą zębową definiuje się jako proces zapalny błony śluzowej jamy ustnej pod ruchomą protezą zębową. U młodych pacjentów zapalenie jamy ustnej związane z protezą zębową może być wynikiem powikłania dziecięcej protezy zębowej lub może wystąpić w trakcie długotrwałego leczenia ortodontycznego z użyciem materiału ruchomego. Opisywano tę patologię zarówno wśród dzieci, jak i młodzieży, proponowano metody diagnostyki i leczenia. W tym przypadku ruchomy aparat ortodontyczny był noszony przez dwa lata w celu wyrównania agenezji zęba.
Klasyczna procedura mikroskopowa obejmuje zwykle pobranie reprezentatywnej próbki z zainfekowanego miejsca (cytologia złuszczająca), która jest przenoszona na szkiełko mikroskopowe i poddawana działaniu wodorotlenku potasu (KOH), barwienia metodą Grama lub barwienia metodą PAS (periodic acid-Schiff). Pobrano próbkę i wysłano do laboratorium w celu hodowli, a wynik był pozytywny dla Candida albicans.
Potem jako porównanie podaliśmy uproszczoną, bezpośrednią metodę mikroskopową. W tej metodzie ślina pacjenta była zbierana na dnie jamy ustnej. Lusterko wewnątrzustne było umieszczone poziomo pod językiem, w kontakcie z błoną śluzową. Gdy ślina pokryje lusterko, usuwano ją z jamy ustnej i kładziono na szkiełko podstawowe (rysunek 2(a)). Następnie próbka została pobrana za pomocą sterylnej sondy umieszczonej bezpośrednio w ślinie pacjenta (rysunek 2(c)), po czym założono szkiełko nakrywkowe. Należy zwrócić uwagę, że optymalnym miejscem do pobrania próbki tą metodą jest okolica bruzd (Rycina 2(b)). Lekarz powinien naciskać palcem na szkiełko w celu rozprowadzenia próbki. Próbka była następnie analizowana pod mikroskopem optycznym z kontrastem fazowym (Rycina 2(d)). Najbardziej interesującym powiększeniem jest ×1000, ponieważ pozwala ono na odróżnienie niepatogennych form drożdży od oportunistycznych form hyficznych. W warunkach patologicznych na każdym ekranie widoczne jest kilka hyfusów, zmieszanych z bakteriami i komórkami jamy ustnej (Rycina 3). Co ważne, metoda ta jest cenna dla określenia skuteczności leczenia. Leczenie polegało na 3-tygodniowym leczeniu miejscowym z zastosowaniem środka przeciwgrzybiczego (amfoterycyna B) oraz zmianie aparatu protetycznego na stały. Pozostałe badania laboratoryjne metodą posiewu były negatywne. W trakcie dwuletniej obserwacji, ta sama procedura wykazała normalizację flory jamy ustnej, z brakiem hyfusów (Rycina 4(b)), połączoną z poprawą kliniczną (Rycina 4(a)).
(a)
(b)
(c)
(d)
.
(a)
(b)
(c)
(d)
3. Wnioski
Mikroskopia bezpośrednia jest szeroko stosowana w laboratoriach do diagnostyki kandydozy. Umożliwia postawienie dokładnej diagnozy dzięki nieinwazyjnej i bezbolesnej metodzie pobierania próbek, szczególnie dobrze sprawdzającej się u młodych pacjentów. Klasyczna procedura, polegająca na pobraniu próbki i przesłaniu jej do laboratorium, jest bardziej czasochłonna i kosztowna. Co więcej, prezentowana metoda nie wymaga utrwalania ani obróbki próbki. Jest to zatem ekonomiczny sposób na zbadanie mikrobioty jamy ustnej pacjenta i określenie ewentualnych zaburzeń równowagi. Chociaż mikroskopia bezpośrednia nie jest tak specyficzna jak hodowla, wydaje się być procedurą z wyboru w diagnostyce pierwszego rzutu. Oczywiście, kompletne badanie kliniczne pozostaje absolutnie konieczne, jak również obszerny wywiad medyczny, w celu zbadania wszelkich towarzyszących chorób ogólnych. Co więcej, takie podejście wymaga doświadczenia w wykrywaniu drożdżaków poprzez obserwację mikroskopową, co nie jest powszechną kompetencją wśród klinicystów. Jednakże identyfikacja nie jest bardzo trudna, a prosta, krótkotrwała formacja może być wystarczająca. W ten sposób coraz więcej lekarzy będzie miało dostęp do tej metody; dlatego też większa świadomość tej prostej analizy mikroskopowej pozwoli klinicystom na natychmiastowe postawienie diagnozy przy fotelu. Ponadto, jak to miało miejsce w przypadku kamer wewnątrzustnych, biorąc pod uwagę postęp urządzeń mikroskopowych, mogą one zostać włączone do koncepcji opieki skoncentrowanej na osobie jako element edukacji i profilaktyki w celu zrozumienia diagnozy i podejmowania świadomych decyzji dotyczących leczenia. Potencjalny rozwój mikroskopów opartych na smartfonach zapewni łatwiejszy dostęp klinicystów do mikroskopii. Mikroskopy oparte na smartfonach są już w użyciu do wykrywania pasożytów lub uzyskania obrazów żywych komórek. Jest to obiecujące podejście do wykonywania dokładnej diagnostyki przy fotelu w przyszłości.
Zatwierdzenie etyczne
Wszystkie procedury wykonywane w badaniu z udziałem ludzi były zgodne ze standardami etycznymi Uniwersytetu w Tuluzie oraz z deklaracją helsińską z 1964 roku i jej poprawkami.
Zgoda
Informowaną zgodę uzyskano od wszystkich pacjentów i ich rodziców. Wszyscy autorzy wyrazili zgodę na publikację.
Konflikt interesów
Autorzy oświadczają, że nie mają konfliktu interesów.
.