Numărul celulelor viabile
Există o varietate de modalități de numărare a numărului de bacterii dintr-o probă. O numărare a celulelor viabile permite identificarea numărului de celule care cresc/se divid în mod activ într-o probă. Metoda de numărare pe placă sau placa de răspândire se bazează pe bacteriile care cresc o colonie pe un mediu nutritiv. Colonia devine vizibilă cu ochiul liber și se poate număra numărul de colonii de pe o placă. Pentru a fi eficientă, diluția probei inițiale trebuie să fie aranjată astfel încât, în medie, să se dezvolte între 30 și 300 de colonii ale bacteriei țintă. Un număr mai mic de 30 de colonii face ca interpretarea să fie nesigură din punct de vedere statistic, iar un număr mai mare de 300 de colonii duce adesea la suprapunerea coloniilor și la imprecizia numărătorii. Pentru a se asigura că se generează un număr adecvat de colonii, se cultivă în mod normal mai multe diluții. Procedura de laborator presupune realizarea unor diluții în serie ale probei (1:10, 1:100, 1:1000 etc.) în apă sterilă și cultivarea acestora pe agar nutritiv într-o farfurie care este sigilată și incubată. Mediile tipice includ agarul Plate count pentru o numărătoare generală sau agarul MacConkey pentru numărarea bacteriilor gram-negative, cum ar fi E. coli. De obicei, un set de plăci este incubat la 22°C timp de 24 de ore și un al doilea set la 37°C timp de 24 de ore. Compoziția nutrientului include, de obicei, reactivi care rezistă la dezvoltarea organismelor nevizate și care fac ca organismul țintă să fie ușor de identificat, adesea printr-o schimbare de culoare a mediului. Unele metode recente includ un agent fluorescent, astfel încât numărarea coloniilor să poată fi automatizată. La sfârșitul perioadei de incubare, coloniile sunt numărate cu ochiul liber, o procedură care durează câteva momente și nu necesită un microscop, deoarece coloniile au de obicei un diametru de câțiva milimetri.
Metoda plăcii turnate este utilizată atunci când analiza caută specii bacteriene care se dezvoltă greu în aer. Analiza inițială se face prin amestecarea unor diluții în serie ale probei în agar nutritiv lichid, care este apoi turnat în sticle. Sticlele sunt apoi sigilate și așezate pe părțile laterale pentru a produce o suprafață de agar înclinată. Coloniile care se dezvoltă în corpul mediului pot fi numărate cu ochiul liber după incubare. Numărul total de colonii se numește numărul total de colonii viabile (TVC). Unitatea de măsură este ufc/ml (sau unități formatoare de colonii pe mililitru) și se referă la proba originală. Calcularea acestuia este un multiplu al numărului de colonii numărate înmulțit cu diluția utilizată. Exemple de numărare a celulelor viabile sunt plăcile de răspândire dintr-o diluție în serie a unei culturi lichide și plăcile de turnare. Cu o placă de împrăștiere se fac diluții în serie în medii lichide și apoi se împrăștie un volum cunoscut din ultimul tub din seria de diluții. Se pot număra apoi coloniile de pe placă și se poate calcula concentrația de bacterii din cultura originală. În metoda plăcii de turnare, o probă bacteriană diluată se amestecă cu agar topit și apoi amestecul se toarnă într-o farfurie Petri. Din nou, coloniile vor fi numărate și se va calcula numărul de celule viabile.
.