Introducere
Blocurile de țesut încorporate în parafină se referă de obicei la specimene de țesut fixate în formol și încorporate în parafină (FFPE) care au fost utilizate în diverse aplicații terapeutice și în cercetare timp de mai multe decenii. Este o metodă utilizată pentru a conserva și pregăti specimene biologice pentru a fi utilizate în cercetarea experimentală, examinare, diagnosticare și dezvoltare terapeutică. Proba de țesut este mai întâi conservată prin fixare cu formalină sau formaldehidă pentru a se asigura că structurile vitale și proteinele din țesut rămân cât mai aproape de starea în care se aflau atunci când încă făceau parte din gazdă. După fixare, se înglobează într-un bloc de parafină pentru a facilita secționarea și montarea pe lame microscopice în scopul examinării.
Proces
Tesuturile sunt mai întâi colectate atât de la gazde bolnave, cât și de la gazde normale. În cazul specimenelor biologice de cancer, oncologul compară adesea tumora primară cu eșantioane care sunt obținute din situsuri metastatice îndepărtate. Țesuturile obținute măsoară, de obicei, doar câțiva centimetri, în funcție de natură și sursă și de țesut. Imediat după excizie, biospecimenul este scufundat în formalină tamponată neutră 10% timp de 18 până la 24 de ore pentru a întări țesutul. Acesta este apoi deshidratat și curățat folosind concentrații din ce în ce mai mari de etanol. Se înglobează apoi în parafină de calitate imunohistochimică, care este folosită în mod special pentru înglobarea țesuturilor fixate în formol. Unul dintre cei mai importanți factori este timpul de fixare, deoarece țesuturile care sunt fixate prea devreme pot fi inutilizabile pentru studiile de biologie moleculară. Durata de fixare trebuie să fie suficient de lungă pentru a asigura conservarea.
După ce au fost achiziționate, probele sunt manipulate cu atenție pentru a menține calitatea. Manipularea necorespunzătoare poate duce la prezentarea unor caracteristici neobișnuite care pot afecta rezultatele sau deducerile cercetării. Metoda de pregătire depinde, de obicei, de cerințele echipei de cercetare. Aceasta poate varia de la specificații privind scopul țesutului, dimensiunea sau tăierea acestuia. Un bun exemplu ar fi tăierea mușchiului de-a lungul „bobului” fibrelor musculare sau de-a lungul acestora. Pe tot parcursul pregătirii eșantioanelor, un medic patolog certificat va fi implicat pentru a se asigura că procedura este finalizată cu acuratețe și, de asemenea, pentru evaluarea calității.
După ce eșantioanele sunt finalizate, acestea sunt depozitate în bănci de țesuturi. Ar trebui, de asemenea, să se păstreze înregistrări utile, cum ar fi informații demografice și momentul în care țesutul a fost colectat sau conservat, deoarece pot fi utile pentru echipa de cercetare. Alte informații critice care ar trebui să fie stocate includ formularele de consimțământ semnate și documentele juridice afiliate specimenului biologic, deoarece acestea pot avea un impact asupra capacității de utilizare a specimenului biologic în cercetare și în studiile clinice.
Aplicații
Blocurile de țesut înglobate în parafină au multe aplicații în cercetare. Aceste blocuri tisulare sunt adesea utilizate în imunohistochimie, unde secțiunile de țesut sunt montate pe o lamă. Aceste secțiuni sunt apoi îmbăiate folosind o soluție care conține anticorpi care se leagă de proteine și structuri. Se poate efectua, de asemenea, o colorare pentru a ajuta la vizualizarea anticorpilor care arată localizarea structurilor prezente în eșantion. Aceste informații pot fi esențiale pentru a ajuta la diagnosticarea unor boli precum boala Alzheimer sau cancerul. Informațiile obținute prin imunohistochimie sunt, de asemenea, vitale pentru multe proiecte privind cancerul care se desfășoară în prezent în laboratoare. Unele dintre ariile terapeutice în care probele de țesut sunt utilizate în mod obișnuit sunt:
-
Imunologie – răspunsurile sistemului imunitar sunt analizate atât în stare bolnavă, cât și în stare sănătoasă. Studiul eșantioanelor de țesut de la un pacient cu boala autoimună ajută la determinarea cauzei și la dezvoltarea terapiei pentru cei afectați.
-
Hematologie – blocurile de țesut încorporate în parafină sunt vitale în studiul diferitelor afecțiuni ale sângelui și a celor conexe. Hematologia este un domeniu crucial care a ajutat la descoperirea a numeroase tratamente pentru bolile legate de sânge și de componentele sale. Unele studii care sunt legate de acest domeniu includ studii privind măduva osoasă, care pot include genetica, toxicologia și regenerarea țesuturilor.
-
Oncologie – blocurile de țesut încorporate în parafină sunt importante în oncologie, deoarece țesuturile tumorale conservate au morfologii caracteristice care nu sunt prezente în alte țesuturi. Echipele de cercetare folosesc adesea aceste probe pentru a căuta proteine care pot ajuta la diagnosticarea și evaluarea bolii. Țesuturile tumorale fixate în formol și încorporate în parafină (FFPE) ar trebui să aibă, în general, un conținut tumoral de 60%.
-
Comparativ – există, de asemenea, blocuri de țesuturi încorporate în parafină care sunt țesuturi sănătoase colectate de la donatori sănătoși. Aceste țesuturi sunt utilizate în scopuri comparative și sunt, de asemenea, importante pentru cercetare și dezvoltare.
Dezvantaj
În blocurile de țesut încorporate în parafină, procesul de fixare necesită, de obicei, utilizarea formalinei sau a formaldehidei care denaturează proteinele care se află în proba de țesut. Acest lucru poate face ca proteinele să fie invizibile pentru anticorpii care sunt special dezvoltați pentru a le detecta. Pentru a compensa, au fost dezvoltate tehnici de recuperare a antigenului pentru a recupera în mod specific proteinele, ADN-ul și ARN-ul din aceste blocuri de țesut. Acest lucru ajută la deschiderea unei vaste arhive de material conservat și adnotat pentru studii de biochimie și biologie moleculară.
Concluzie
Calitatea blocurilor de țesut incluse în parafină este crucială pentru lucrările care utilizează aceste probe ca sursă de proteine, ADN și ARN. Acest lucru se datorează faptului că până și țesutul cel mai bine conservat va conține proteine inactive parțial degradate, ADN și ARN.
.