Importanța fixării
Pentru a studia țesuturile cu ajutorul unui microscop, acestea trebuie să fie conservate (fixate) și tăiate în secțiuni suficient de subțiri pentru a fi translucide. Fixarea este o etapă critică în pregătirea secțiunilor histologice. Dacă nu este efectuată în condiții optime sau dacă fixarea este întârziată, un specimen de țesut poate fi deteriorat ireversibil. Oricât de multă atenție s-ar acorda ulterior prelucrării țesutului, microtomiei și colorației, informațiile morfologice și histochimice care pot fi obținute din specimen vor fi compromise.
Obiectivul general al fixării țesuturilor este de a păstra celulele și componentele tisulare într-o „stare asemănătoare cu cea de viață” sau o alterare cât mai mică a țesutului viu și de a face acest lucru astfel încât să permită prepararea unor secțiuni subțiri, colorate. Alegerea fixatorului și a protocolului de fixare poate depinde de etapele suplimentare de procesare și de analizele finale care sunt planificate. Nu există un fixator perfect, deși formaldehida se apropie cel mai mult. Prin urmare, există o varietate de fixatori care pot fi utilizați, în funcție de tipul de țesut prezent și de caracteristicile care urmează să fie demonstrate.
Tipul de fixare
Fixarea țesuturilor poate fi realizată prin mijloace chimice sau fizice.
Metodele fizice includ încălzirea, microundele și crioconservarea (liofilizarea).
Fixarea chimică se realizează de obicei prin scufundarea specimenului în fixator (fixare prin imersie) sau, în cazul animalelor mici sau al unor organe întregi, cum ar fi un plămân, prin perfuzarea sistemului vascular cu fixator (fixare prin perfuzie). Pentru anumite proceduri histochimice specializate, fixatorii au fost uneori aplicați sub formă de vapori. De exemplu, paraformaldehida și tetroxidul de osmiu pot fi folosite pentru fixarea în stare de vapori a țesuturilor liofilizate.
- Aflați mai multe despre Soluții de fixare populare
Mecanismul de fixare
Cele două mecanisme principale de fixare chimică sunt reticulația și coagularea.
Legatura încrucișată implică formarea de legături covalente atât în interiorul proteinelor, cât și între ele, ceea ce face ca țesutul să se rigidizeze și, prin urmare, să reziste la degradare.
Coagularea este cauzată de deshidratarea proteinelor prin utilizarea de alcooli sau acetonă. Acești reactivi elimină și înlocuiesc apa liberă din celule și țesuturi și determină o modificare a structurii terțiare a proteinelor prin destabilizarea legăturilor hidrofobe. Se mai numește și denaturare.
Factori care influențează fixarea
- Temperatura: În general, o creștere a temperaturii a crescut rata de fixare, dar a crescut și rata de autoliză și difuzie a elementelor celulare. În mod tradițional, între 0 și 4 °C a fost considerată temperatura ideală sau de fixare a specimenelor. În prezent, fixarea se realizează în mod obișnuit la temperatura camerei.
- Dimensiuni: 1-4 mm grosime
- Raportul de volum: Cel puțin de 15-20 de ori mai mare decât volumul țesutului
- Timp: 24 – 48 de ore
- pH: Trebuie menținut în intervalul fiziologic, între pH 4-9. pH-ul pentru conservarea ultrastructurii trebuie să fie tamponat între 7,2 și 7,4.
Protocoale
- Metode și protocoale de decalcifiere a materialului osos
- Protocol standard pentru țesut fixat în formol și încorporat în parafină
Legături utile
- Procesul de fixare și de Nature of Fixatives
- Popular Fixative Solutions
- Basic Introduction to Histology
- National Society for Histotechnology
- An Introduction to Decalcification
- A Practical Guide to Good Histology Practice
.