Imunoanalize pe bază de bandă
Puncte cheie
- Simplu de utilizat
- Rezultatele pot fi disponibile în 15 minute
- Costuri reduse, fără nevoie de echipamente suplimentare
- Stabil și robust la depozitare
Deși metodele rapide au avut un impact major asupra testelor microbiologice în ultimii douăzeci de ani sau cam așa ceva, doar o mână de dezvoltări pot pretinde că au scos testele din laborator. Unul care poate, și care este utilizat pe scară largă ca urmare a acestui fapt, este testul de imunoanaliză cu flux lateral, cunoscut și sub numele de test imunocromatografic sau test cu bandă. La fel ca multe dintre cele mai bune idei, imunoanalizele cu flux lateral iau o tehnologie inteligentă și sofisticată și o transformă în ceva atât de simplu de utilizat încât aproape oricine o poate folosi.
Tehnologia Tehnologia de bază care stă la baza imunoanalizelor cu flux lateral a fost descrisă pentru prima dată în anii 1960, dar prima aplicație comercială a fost testul de sarcină la domiciliu Clearview de la Unipath, lansat în 1988. De atunci, aceeași tehnologie a fost utilizată pentru a dezvolta o gamă largă și în continuă creștere de teste pentru aplicații clinice, veterinare, agricole, din industria alimentară, de bioapărare și de mediu.
Testele cu bandă adezivă sunt extrem de versatile și sunt disponibile pentru o gamă enormă de analiți, de la proteine din sânge la micotoxine și de la agenți patogeni virali la toxine bacteriene. A fost dezvoltat chiar și un test pentru producătorii de vinuri pentru a evalua cantitatea de putregai Botrytis în strugurii proaspăt recoltați.
Imunoanalizele cu flux lateral sunt în esență imunoanalize adaptate pentru a funcționa de-a lungul unei singure axe pentru a se potrivi cu formatul benzilor de testare. O serie de variații ale tehnologiei au fost transformate în produse comerciale, dar toate funcționează după același principiu de bază.
Cum funcționează un test imunocromatografic în flux lateral?
O bandă de testare tipică este formată din următoarele componente:
- Sample pad – un tampon absorbant pe care se aplică proba de test
- Conjugat sau tampon de reactiv – acesta conține anticorpi specifici pentru analitul țintă conjugat cu particule colorate (de obicei particule de aur coloidal, sau microsfere de latex)
- Membrană de reacție – de obicei, o membrană hidrofobă de nitroceluloză sau de acetat de celuloză pe care sunt imobilizați anticorpii împotriva analitului-țintă într-o linie de-a lungul membranei ca zonă de captare sau linie de testare (poate fi prezentă și o zonă de control, conținând anticorpi specifici pentru anticorpii conjugați)
- Mică sau rezervor de deșeuri – un tampon absorbant suplimentar conceput pentru a atrage proba peste membrana de reacție prin acțiune capilară și pentru a o colecta
Componentele benzii sunt de obicei fixate pe un material suport inert și pot fi prezentate într-un format simplu de tijă sau în interiorul unei carcase de plastic cu un orificiu de prelevare a probei și o fereastră de reacție care prezintă zonele de captare și de control.
Există două tipuri principale de imunoanaliză în flux lateral utilizate în testele microbiologice:
Sesizări sandwich cu dublu anticorp În acest format, proba migrează de pe plăcuța de probă prin plăcuța de conjugat, unde orice analit țintă prezent se va lega de conjugat. Proba continuă apoi să migreze pe membrană până când ajunge în zona de captare, unde complexul țintă/conjugat se va lega de anticorpii imobilizați, producând o linie vizibilă pe membrană. Proba continuă apoi să migreze de-a lungul benzii până când ajunge în zona de control, unde conjugatul în exces se va lega și va produce o a doua linie vizibilă pe membrană. Această linie de control indică faptul că proba a migrat pe membrană așa cum era prevăzut. Două linii clare pe membrană reprezintă un rezultat pozitiv. O singură linie în zona de control reprezintă un rezultat negativ. Testele sandwich cu dublu anticorp sunt cele mai potrivite pentru analiți mai mari, cum ar fi agenții patogeni bacterieni și virușii, cu mai multe situsuri antigenice.
Testele competitive Testele competitive sunt utilizate în principal pentru testarea moleculelor mici și diferă de formatul sandwich cu dublu anticorp prin faptul că tamponul conjugat conține anticorpi care sunt deja legați de analitul țintă sau de un analog al acestuia. În cazul în care analitul țintă este prezent în probă, acesta nu se va lega de conjugat și va rămâne neetichetat. Pe măsură ce proba migrează de-a lungul membranei și ajunge în zona de captare, un exces de analit neetichetat se leagă de anticorpii imobilizați și blochează captarea conjugatului, astfel încât nu se produce nicio linie vizibilă. Conjugatul nelegat se va lega apoi de anticorpii din zona de control, producând o linie de control vizibilă. O singură linie de control pe membrană reprezintă un rezultat pozitiv. Două linii vizibile în zonele de captare și de control reprezintă un rezultat negativ. Cu toate acestea, în cazul în care nu este prezent un exces de analit țintă neetichetat, se poate produce o linie slabă în zona de captare, indicând un rezultat neconcludent. Testele competitive sunt cele mai potrivite pentru testarea moleculelor mici, cum ar fi micotoxinele, care nu se pot lega la mai mult de un anticorp simultan. Există o serie de variante ale tehnologiei fluxului lateral. Zona de captare de pe membrană poate conține antigene sau enzime imobilizate – în funcție de analitul țintă – mai degrabă decât anticorpi. De asemenea, este posibil să se aplice mai multe zone de captare pentru a crea un test multiplex. De exemplu, au fost dezvoltate benzi de testare comerciale capabile să detecteze atât toxinele EHEC Shiga ST1, cât și ST2 separat în aceeași probă.
Imunoenzile în flux lateral sunt simplu de utilizat de către operatorii neinstruiți și, în general, produc un rezultat în 15 minute. Ele sunt foarte stabile și robuste, au un termen de valabilitate lung și nu necesită, de obicei, refrigerare. De asemenea, producția lor este relativ ieftină. Aceste caracteristici le fac ideale pentru utilizarea la punctul de îngrijire și pentru testarea probelor pe teren, precum și în laborator. Cu toate acestea, sensibilitatea lor este limitată în lipsa unor proceduri suplimentare de concentrare sau de cultivare.
Teste cantitative Deși majoritatea imunoanalizelor în flux lateral sunt capabile să furnizeze doar un rezultat calitativ, este posibil să se obțină un anumit grad de cuantificare prin măsurarea cantității de conjugat legat la zona de captare. Acest lucru poate fi realizat cu ajutorul unui cititor dedicat pentru a măsura intensitatea liniei de testare colorate. De exemplu, Neogen Corporation a dezvoltat cititorul de flux lateral Accuscan™ pentru utilizarea cu gama sa de kituri de testare Reveal®, iar Charm Sciences furnizează, de asemenea, un cititor pentru gama sa Rosa® de benzi de testare a micotoxinelor. Tehnici mai sofisticate, cum ar fi conjugatele marcate cu coloranți fluorescenți, au fost, de asemenea, dezvoltate pentru a îmbunătăți potențialul cantitativ al testelor în flux lateral. Aplicații În cei 20 de ani de la lansarea primului test de curgere laterală, a fost dezvoltată o gamă foarte largă de teste diferite bazate pe aceeași tehnologie. Primele kituri disponibile în comerț au fost destinate domeniului diagnosticului clinic, dar în prezent există produse cu aplicații în aproape toate ramurile microbiologiei.
Microbiologie clinică – au fost dezvoltate teste de flux lateral pentru agenți patogeni bacterieni, virusuri respiratorii și enterice, paraziți intestinali și toxine bacteriene. Multe dintre produsele de imunoanaliză cu flux lateral concepute pentru sectorul clinic sunt destinate a fi utilizate la punctul de îngrijire pentru testarea directă a probelor de fecale, sânge și urină și a tampoanelor de nas și gât, unde operarea simplă și viteza testelor este esențială pentru utilizarea lor în afara laboratorului. Cu toate acestea, aceleași benzi de testare pot fi, de asemenea, utile ca test rapid de confirmare în urma cultivării în laborator a probelor clinice.
Microbiologie alimentară și agricolă – sunt disponibile benzi de testare pentru agenți patogeni bacterieni de origine alimentară, toxine bacteriene și fungice. În sectorul microbiologiei alimentare, este mai probabil ca principalele aplicații să fie în laborator, deși există kituri de testare pe teren pentru micotoxine în probele de cereale. Testarea pentru agenții patogeni bacterieni de origine alimentară implică, în general, cel puțin o etapă de îmbogățire înainte de utilizarea benzii de analiză pentru a confirma prezența sau absența agentului patogen. Unii producători, cum ar fi Hygiena, au dezvoltat medii de îmbogățire și metode special concepute pentru a fi utilizate cu benzile de testare cu flux lateral. Benzile de testare pot fi, de asemenea, utile pentru confirmarea rapidă a identității izolatelor bacteriene din testele microbiologice convenționale.
Microbiologia apei și a mediului – teste disponibile în număr limitat.
Căutați cele mai recente actualizări în Metode rapide de testare microbiologică trimise la adresa dvs. de e-mail? Abonați-vă la buletinul electronic gratuit rapidmicrobiology
.