Isolarea Malassezia furfur de la o pisică

Genul Malasseziaconstituie drojdii lipofile despre care se știe că sunt componente ale microflorei pielii umane și a multor mamifere și păsări și sunt rareori izolate din mediul înconjurător (11). Aceste drojdii au proprietatea fiziologică tipică de a utiliza lipidele ca sursă de carbon. Cu excepția Malassezia pachydermatis, restul speciilor din genul Malassezia necesită suplimentarea cu acizi grași cu lanț lung (C12 până la C24) pentru creșterea in vitro. Taxonomia acestor drojdii a fost întotdeauna un subiect de controversă (8). Cu câțiva ani în urmă, speciile acceptate erauM. furfur (Robin) Baillon 1889 și M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Recent, genul a fost revizuit pe baza datelor moleculare și a cerințelor lipidice și a fost extins pentru a include șapte specii: M. furfur,M. pachydermatis, M. sympodialis,M. globosa, M. obtusa, M. restricta și M. slooffiae (4).

M. furfur este un patogen cutanat oportunist cunoscut al oamenilor. Este agentul cauzal al pitiriazisului versicolor, al pitiriazisului capitat, al dermatitei seboreice și al foliculitei. Cu toate acestea, importanța speciilor Malassezia este în creștere ca agent patogen emergent, deoarece a fost descris faptul că acestea provoacă infecții sistemice la pacienții imunocompromiși și la nou-născuții care primesc lipide intravenoase (1, 12). Scopul acestui studiu a fost acela de a studia microbiota lipofilă din canalele auditive externe ale pisicilor fără otită externă. În această lucrare este descrisă prima izolare a M. furfur de la o pisică.

Canalele urechii externe a 33 de pisici de casă (17 masculi și 16 femele) fără otită externă au fost prelevate cu ajutorul unui tampon. Probele au fost cultivate pe agar glucoză Sabouraud (SGA; Biolife s.r.l., Milano, Italia), SGA suplimentat cu ulei de măsline (10 ml/litru) și mediu Leeming (10 g de peptonă, 5 g de glucoză, 0,1 g de extract de drojdie, 4 g de bilă de bou deshidratată, 1 ml de glicerol, 0,5 g de monostearat de glicerol, 0,5 ml de Tween 60, 10 ml de lapte de vacă integral degresat, 12 g de agar pe litru, pH 6,2) (9). Toate mediile au conținut 0,05% cloramfenicol și 0,05% cicloheximidă. Fiecare frotiu de cerumen a fost fixat termic, colorat cu Diff-Quick ș i examinat la microscop pentru a determina prezența celulelor tipice de Malassezia. Plăcile au fost incubate la 35 °C ș i examinate după 3, 5, 7 ș i 14 zile. În cazul în care s-a detectat creș tere, cinci colonii diferite au fost selectate din SGA suplimentat cu ulei de măsline ș i din mediul Leeming ș i subcultivate pe SGA pentru a determina dependența lor de lipide. M. pachydermatis a fost identificat prin morfologie microscopică ș i prin capacitatea de a se dezvolta pe SGA. Identificarea drojdiilor dependente de lipide s-a bazat pe testul de difuzie cu Tween propus de Guillot et al. (7), pe testul de asimilare Cremophor EL ș i pe divizarea esculinei descrisă de Mayser et al. (10), iar următoarele tulpini tip au fost folosite ca martori: M. furfur CBS 1878T, M. furfur CBS 7019NT (unde NT reprezintă neotipul), M. sympodialis CBS 7222T, M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T și M. obtusa CBS 7876T (furnizate cu amabilitate de E. Guého și J. Guillot). Testul de difuzie Tween permite diferențierea speciilor dependente de lipide în funcție de capacitatea lor de a asimila diverși esteri de polioxietilen sorbitan (Tweens 20, 40, 60 și 80). Cremophor EL conține ulei de ricin și acid ricinoleic și este utilizat ca un caracter cheie suplimentar pentru diferențierea speciilor M. furfur, M. slooffiae și M. sympodialis.

Celulele tipice de Malassezia au fost evidente în frotiurile colorate Diff-Quick ale cerumenului de la șapte pisici, dar numai cinci dintre aceste probe au fost pozitive prin cultură. Speciile Malassezia au fost izolate de la șapte pisici (21,2%), dar în două frotiuri colorate cu Diff-Quick de la aceste pisici nu au fost detectate celulele Malassezia tipice. Nu au fost izolate drojdii aparținând altor specii. La șase pisici (18,1%), doar M. pachydermatis a fost izolat în prima săptămână de incubare (trei izolate au fost cultivate la 3 zile, două la 5 zile și unul la 7 zile). Doar o specie dependentă de lipide a fost izolată de la o pisică la 7 zile de incubație. Acest izolat a format colonii cremoase, netede și umflate cu un diametru mediu de 4,3 mm pe agar Dixon modificat (36 g de extract de malț, 6 g de peptonă, 20 g de bilă de bou deshidratată, 10 ml de Tween 40, 2 ml de glicerol, 2 ml de acid oleic, 12 g de agar pe litru, pH 6,0) (4) după 7 zile de incubare la 32°C. Textura era friabilă, iar celulele erau ovoidale sau sferice (1,5-3,0 μm pe 1,5-4 μm). Mugurii s-au format pe o bază largă, iar în unele celule au fost observate filamente scurte. Reacția la catalază a fost pozitivă. Acest izolat a utilizat cele patru Tweens (20, 40, 60 ș i 80), a asimilat Cremophor EL ș i a fost slab pozitiv la scindarea esculinei, la fel ca ș i tulpinile tip M. furfur CBS 1878T ș iM. furfur CBS 7019NT (figura 1). În conformitate cu aceste constatări, această drojdie dependentă de lipide a fost identificată ca fiind M. furfur(7, 10).

7.↵

1. Guillot J.,
2. Guého E.,
3. Lesourd M.,
4. Midgley G.,
5. Chévrier G.,
6. Dupont B.

Identificarea speciilor de Malassezia. O abordare practică.J. Mycol. Med.61996103110

8.↵

1. Ingham E.,
2. Cunningham A. C.

Malassezia furfur.J. Med. Vet. Mycol.311993265288

9.↵

1. Leeming J. P.,
2. Notman F. H.

Metode îmbunătățite de izolare și enumerare a Malassezia furfur din pielea umană.J. Clin. Microbiol.25198720172019

10.↵

1. Mayser P.,
2. Haze P.,
3. Papavassilis C.,
4. Pickel M.,
5. Gruender K.,
6. Guého E.

Diferențierea speciilor de Malassezia: selectivitatea Cremophor EL, a uleiului de ricin și a acidului ricinoleic pentru M. furfur.Br. J. Dermatol.1371997208213

11.↵

1. Midgley G.

The diversity of Pityrosporum (Malassezia) yeasts in vivo and in vitro.Mycopathologia1061989143153

12.↵

1. Van Belkum A.,
2. Boekhout T.,
3. Bosboom R.

Monitorizarea răspândirii infecțiilor cu Malassezia într-o unitate de terapie intensivă neonatală prin tipare genetică mediată de PCR.J. Clin. Microbiol.32199425282532