….. bifida (SB) este cel mai frecvent defect congenital invalidant din America de Nord, cu o frecvență de , 3-4 la fiecare 10.000 de nașteri vii. Forma cea mai frecventă, și cea mai severă, este mielomeningocelul (MM), reprezentând peste 90% din toate cazurile de SB. MM este o leziune a coloanei vertebrale caracterizată de o deschidere în coloana vertebrală prin care ies meningele și țesuturile neuronale. Consecințele clinice ale leziunii spinale includ dificultăți de deambulare, senzație, incontinență și probleme de învățare . Deficitele de atenție la persoanele cu MM au fost identificate prin intermediul ratingurilor de tulburare de hiperactivitate cu deficit de atenție (ADHD). Copiii cu MM au o probabilitate mai mare decât martorii de a prezenta creșteri semnificative din punct de vedere clinic la evaluările de ADHD (31% la MM față de 7% în populația generală) . În special, 74,5% dintre indivizii cu MM cu creșteri semnificative la evaluările ADHD au fost în concordanță cu subtipul predominant neatent al ADHD . Un studiu independent realizat de Ammerman et al. a arătat rezultate similare . Acidul folic este o vitamină B importantă și în legătură cu MM. Studiile arată că suplimentarea cu acid folic scade atât apariția cât și recurența defectelor de tub neural cu 72% în șapte țări . Astfel de date au condus la recomandări de sănătate publică pentru suplimentarea cu acid folic periconcepțional, iar în 1998 la fortificarea tuturor produselor cerealiere din Statele Unite cu acid folic . Acidul folic este esențial pentru procesele celulare, inclusiv pentru sinteza nucleotidelor și pentru metilare. Enzima, 5, 10-metilen-tetrahi- drofolat reductaza (MTHFR) funcționează în calea care transformă folatul în metaboliți care pot fi utilizați pentru procesele celulare, inclusiv metilarea promotorilor de gene și a proteinelor, ARN, ADN, aminoacizi și sinteza fosfolipidelor (a se vedea figura 1 ). De exemplu, se sugerează că metilarea fosfolipidică (PLM) stimulată de dopamină este un mecanism important de modulare a tragerii neuronilor, iar activitatea de metilare deficitară poate contribui la tulburările de atenție . Celulele de neuroblastom (SH-SY5Y) tratate cu 5-formilTHF au provocat o metilare crescută a receptorului de dopamină D4 (DRD4) prin proteină metil-transferază și S-adenozil-metionină, ceea ce a dus la o creștere dependentă de doză atât în PLM bazală, cât și în PLM stimulată de dopamină . DRD4 este una dintre cele mai replicate gene identificate ca fiind asociate cu ADHD . Variantele genetice în MTHFR au fost asociate cu MM . Cele mai frecvente două variante studiate sunt C677T (rs1801133) și A1298C (rs1801131). Prezența oricăreia dintre aceste variante în stare homozigotă crește șansele de a fi afectat de SB de 1,5 până la 2,4 ori față de cele ale populației generale, deși datele pentru 1298C sunt contradictorii . Mai multe studii fac legătura între nivelurile de folat/homocisteină și funcțiile cognitive. De exemplu, pacienții cu deficiențe de folat în sistemul nervos central prezintă deficite cognitive . Morris și colab. au arătat că, în raport cu martorii, persoanele cu un nivel scăzut de folat aveau o funcție de memorie semnificativ redusă . Alte studii arată rezultate similare; și anume, funcțiile cognitive se îmbunătățesc odată cu niveluri mai ridicate de folat și scad odată cu niveluri mai ridicate de homocisteină. MTHFR este un regulator cheie al nivelurilor de folat față de homocisteină . În acest studiu am testat dacă variația genetică a enzimei MTHFR de metabolizare a folatului a fost asociată cu manifestarea fenotipului comportamental ADHD la copiii cu MM. Participanții la acest studiu au fost o populație extinsă față de cea utilizată în Burmeister et al . Eșantionul genotipat pentru SNP-uri în gena MTHFR a fost format din 262 de persoane cu MM. Cincizeci la sută dintre acești indivizi erau albi și 50% erau hispanici. Eșantionul a fost alcătuit din 53% femei și 47% bărbați, iar vârsta mediană a fost de 12,4 ani. Scalele de evaluare a părinților pentru ADHD au fost, de asemenea, completate pe alți pacienți pentru care ADN-ul nu era disponibil. Acești pacienți au fost folosiți pentru a compara frecvența rezultatelor pozitive ale testelor ADHD la persoanele cu MM față de testele ADHD pozitive la martori. Pentru această comparație, dimensiunile grupurilor au fost următoarele: eșantionul MM a constat din 478 de pacienți, iar eșantionul de control a constat din 196 de persoane de control neafectate de MM. Apartenența etnică a indivizilor cu MM și a indivizilor de control fără MM sunt enumerate în tabelul 1 . Ambele eșantioane au fost formate din aproximativ 50% bărbați și 50% femei, cu o vârstă mediană de 13,06 ani în cazul pacienților cu MM și o vârstă mediană de 12,73 ani în cazul grupului de control. Aceste experimente au fost întreprinse cu înțelegerea și consimțământul scris al fiecărui subiect, respectând Codul de etică al Asociației Medicale Mondiale. Studiul a fost aprobat de Comitetul de evaluare instituțională al Centrului de Științe ale Sănătății al Universității Texas din Houston cu numărul de aprobare HSC-MS- 00-0001 și de Comitetul de etică a cercetării de la Spitalul pentru copii bolnavi cu numărul de aprobare 1000006149. Părinții fiecărui participant au completat scala de evaluare Swanson Nolan Achenbach Pelham-IV (SNAP-IV; www.adhd.net) pentru a evalua starea ADHD. Scala SNAP-IV este formată din 18 itemi, 9 reprezentând comportamente asociate cu neatenția și 9 cu hiperactivitatea-impulsivitatea. Aceasta este concepută pentru a se alinia cu criteriile din Manualul de diagnostic și statistică-IV (DSM-IV), acceptat pe scară largă ca standard de aur pentru diagnosticarea ADHD. Părinții au evaluat comportamentul copilului lor pe o scară de patru puncte, de la zero (deloc) la trei (foarte mult), așa cum a fost descris anterior . Participanții care au atins praguri definite clinic, reprezentând 5% din partea superioară a populației pe scara de neatenție, au fost desemnați ”ADHD- Tip predominant neatent”; cei cu creșteri doar în partea superioară a celor 5% pe scara de hiperactivitate-impulsivitate au reprezentat ”Tipul hiperactiv-impulsiv”. Elevațiile pe ambele scale au reprezentat ”Tipul ADHD combinat”. SNAP-IV este o evaluare fiabilă a comportamentului ADHD bazată pe părinți, cu o bună concordanță cu interviurile structurate , utilizată pe scară largă pentru a evalua ADHD în studiile clinice și în numeroase studii de cercetare în SUA și în întreaga lume . Selecția SNP, genotiparea și analiza statistică au fost efectuate așa cum au fost descrise anterior . Pe scurt, SNP-urile au fost selectate în cadrul genei de referință MTHFR (NM_005957) din baza de date Genome Browser dbSNP Build132 a Universității din California Santa Cruz (UCSC), precum și din versiunea publică HapMap3 # 27 . SNP-urile au fost prioritizate pentru genotipare pe baza funcției potențiale (de exemplu, dacă varianta modifică aminoacidul), a localizării genei și a unei frecvențe a alelei minore mai mare de 0,05. Au fost selectate în total 7 SNP-uri în gena MTHFR (a se vedea figura 2 pentru locații aproximative): rs3737965, rs2066470, rs9651118, rs1801133 (cunoscut și sub numele de 677C . T), rs1801131 (cunoscut și sub numele de 1298A . C, rs2274976 și rs4846049. ADN-ul a fost colectat de la pacienții cu MM pentru analiză. Genotiparea a fost realizată cu ajutorul …
.