Biologi I Laborationshandbok

Saker som du bör kunna förklara för någon annan efter denna laboration:

• Sammansättning
• Total förstoring
• Binokulärt
• Synfält
• Fokuseringsdjup
• Inversionsfenomen

Slideshow

Bakgrund

Många organismer (bakterier) och delar av organismer (celler) som biologer studerar är för små för att kunna ses med det mänskliga ögat. Vi använder mikroskop för att förstora prover för vår undersökning. Ordet mikroskop betyder ”att se litet” och det första primitiva mikroskopet skapades 1595.

Det finns flera typer av mikroskop men du kommer främst att använda ett sammansatt ljusmikroskop. Denna typ av mikroskop använder synligt ljus som fokuseras genom två linser, okularet och objektivet, för att betrakta ett litet prov. Endast celler som är tillräckligt tunna för att ljuset ska kunna passera igenom kommer att vara synliga med ett ljusmikroskop i en tvådimensionell bild.

Ett annat mikroskop som du kommer att använda i labbet är ett stereoskopiskt mikroskop eller ett dissektionsmikroskop. Den här typen av mikroskop använder synligt ljus för att se tjockare, större exemplar, t.ex. en insekt, i 3D. Eftersom du tittar på större prover är förstoringsområdet för det dissekerande mikroskopet lägre än för det sammansatta ljusmikroskopet.

Din instruktör kommer att gå igenom delarna och funktionerna hos de sammansatta ljusmikroskop som vi kommer att använda under hela terminen. Fyll i tabellen på nästa sida för att hjälpa dig att komma ihåg denna viktiga information. Du kommer troligen att återkomma till den här sidan ofta. Här är en bild på ett ljusmikroskop som du kan märka och anteckna på.

.

Del av mikroskop	Funktion
Okulärer (okularer)
Arm
Revolutionerande näsdel
Steg
Objektiv
Glideklämmor
Stegreglagehandtag
Kondensor
Iris-membran
Subscenelampa (Illuminator)
Grovjustering
Finjustering justering
Base

Regler och anvisningar för användning av mikroskop med sammansatt ljus

Din instruktör kommer att diskutera användningen av mikroskopet med din klass. De rätta stegen att följa för korrekt fokusering kommer att gås igenom. Ni ska följa den stegvisa sekvensen som er instruktör anger. Även om du är bekant med den här typen av mikroskop förväntas du ändå gå igenom fokuseringsgenomgången med resten av klassen.

1. Viktiga allmänna regler:
   1. Bär alltid mikroskopet med två händer – placera en hand på mikroskoparmen och den andra handen under mikroskopbasen.
   2. Rör inte objektivlinserna (dvs. objektivens spetsar).
   3. Håll objektiven i skanningsläget och håll scenen låg när du lägger till eller tar bort objektglas.
   4. Se alltid på mikroskopet från sidan när du gör stora förändringar i höjden på scenen.
   5. Objektivobjektivlinserna får endast rengöras med speciellt objektivpapper och objektivrengöringsvätska.
   6. Lek INTE handpistol – inget mikroskop får plockas isär. Rapportera funktionsstörningar till din lärare.
2. För att hämta ett mikroskop från laboratorieskåpet:
   1. Först rensa området på bordet för mikroskopet – undvik ett trångt arbetsområde.
   2. Mikroskopen är numrerade i enlighet med var du sitter. Hitta numret under din bänk och använd motsvarande mikroskop.
   3. Bär mikroskopet med TVÅ händer.
   4. Säkra elkabeln – låt den inte hänga ner från bordet!
3. När du återställer mikroskopet till laboratorieskåpet:
   1. Sänk scenen.
   2. Rota skanningsobjektivet på plats över scenen.
   3. För bort objektglaset från scenen.
   4. Rengör objektglaset och objektivet med hjälp av den speciella rengöringsvätska för linser och det papper som medföljer.
   5. Centrera scenen så att den inte sticker ut för långt åt båda hållen.
   6. Säkra sladden genom att linda in den under mikroskopets scen..
   7. Sätt tillbaka dammskyddet.
   8. Bär mikroskopet med TVÅ händer.
   9. Turnera mikroskopet till samma fack som du fick det ifrån genom att se till att sätta det med armen utåt.
4. För att fokusera mikroskopet:
   Se på mikroskopet från sidan:
   1. Sänk scenen så långt som den kan gå.
      1. Vrid objektiven så att skanningsobjektivet pekar ner mot scenen.
      2. Justera scenen så att bländaren (öppningen i mitten av scenen) är centrerad.
      3. Placera objektglaset på scenen med hjälp av scenklyftan för att säkra det. Stadiumsfästet rör sig endast inom scenens horisontella plan, och det säkrar objektglaset genom att knappt röra vid objektglasets nedre högra hörn.
      4. Centrera provet på ditt objektglas under objektivet genom att flytta scenen.
      5. Förflytta scenen uppåt nästan så långt det går, var noga med att objektglaset inte ska röra objektivet – titta från sidan så att du kan se hur högt du ska höja scenen.
   2. Se genom okulären:
      1. Använd grovjusteringsratten för att flytta scenen nedåt tills provet kommer i fokus, skärp sedan fokus.
      2. Centrera provet i mikroskopets fält genom att flytta scenen.
   3. Se på mikroskopet från sidan:
      1. Rör sakta objektivet med låg effekt (10X) i läge.
   4. Se genom okulären:
      1. Skärpa skärpan, om nödvändigt, med grovjusteringsratten. Endast en minimal justering är vanligtvis nödvändig.
      2. Centrera provet i fält, om nödvändigt.
   5. Se på mikroskopet från sidan:
      1. Rota det högeffektiva objektivet på plats mycket försiktigt!
   6. Se genom okulären:
      1. Skärpa skärpan med hjälp av endast finjusteringsratten. Centrera om det behövs. (Om provet har ”försvunnit”, återgå omedelbart till låg effekt och centrera provet på nytt.)
      2. När du tar bort ett objektglas, återställ alltid objektiven till skanningsläget och sänk scenen innan du lyfter av objektglaset!

Del 1: Total förstoring

Förstoring är förhållandet mellan bildstorleken med mikroskopet och objektets faktiska storlek. När man säger att förstoringen är 10 är den bild man ser med mikroskopet tio gånger större än om man betraktar föremålet med blotta ögat. Kom ihåg att med ett sammansatt ljusmikroskop förstorar du med två linser, så för att beräkna den totala förstoringen multiplicerar du den objektiva förstoringen med den okulära förstoringen. Titta på mikroskopet och använd tabellen nedan för att beräkna den totala förstoringen för varje objektiv:

	Objektivobjektiv	Okularobjektiv	= Total förstoring
Scanobjektiv
Lågt objektiv
Hög objektiv

Del 2: Inverteringsfenomenet

Få en bild med bokstaven ”e” som finns tillgänglig i klassrummet. Betrakta objektglaset med ögonen och placera det sedan på mikroskopet. Använd fokuseringssekvensen för att betrakta objektglaset under låg effekt.

Procedur

1. Teckna bokstaven ”e” så som den ser ut när du tittar på objektglaset utan mikroskop.
2. Teckna bokstaven ”e” så som den ser ut när du tittar på objektglaset under mikroskopet.
3. Förflytta objektglaset åt höger med hjälp av den mekaniska stagehävstången samtidigt som du tittar genom okulären. Åt vilket håll rör sig ”e”?
4. Förflytta objektglaset bort från dig med hjälp av den mekaniska spaken medan du tittar genom okulären. Vilket håll rör sig ”e”?

Ange inverteringsfenomenet med egna ord.

Del 3: Synfältet

Synfältet är den mängd av provet som du ser när du tittar genom objektiven. Synfältet minskar vid högre förstoringar.

Förfarande

Placera en blå plastlinjal över scenöppningen så att linjalens kant syns som en vertikal linje längs fältdiametern. Uppskatta fältstorleken i millimeter för vart och ett av objektivobjektiven.

Scan __________ Låg (10X) __________ Hög (40X) __________

Del 4: Skärpedjup

Skärpedjupet är den tjocklek av provet som förblir fokuserad vid en viss förstoring. Fokusdjupet minskar vid högre förstoringar.

Procedur

Få tag på ett färgat trådglas och betrakta det under skanning eller låg effekt. Bestäm sedan vilken färgad tråd som är:

• Ovanpå
• I mitten
• Underpå

Hänvisning: med hjälp av instruktionerna för fokusering, fokusera på det område där de tre trådarna korsar varandra. Använd finfokuseringen för att urskilja trådarnas ordning.

Del 5: Att göra en våt montering

Under hela terminen förväntas du framgångsrikt göra ett antal enkla preparationer av diapositiv som kallas ”våtmonteringar”. Exemplaret som ska observeras placeras på ett rent objektglas, en droppe eller två vatten tillsätts och ett täckglas placeras försiktigt över vattnet och exemplaret. Din instruktör kommer att demonstrera denna teknik.

Förbered en våtmontering av dammvatten enligt nedanstående procedur:

1. Placera en droppe dammvatten på ett rent glasobjektsglas med hjälp av engångspipetten av plast.
2. Täck dammvattnet på objektsglaset med ett täckglas. Försök att placera täckglaset i en vinkel för att undvika luftbubblor.
3. Torka bort överflödig vätska på objektglaset.
4. Placera objektglaset på mikroskopet för att observera provet.
   1. Starta med skanningsobjektivet
   2. Växla försiktigt till de låga och höga objektiven vid behov.

Förhoppningsvis kommer du att se några levande organismer i ditt dammvatten. Om du ser grönt material är det förmodligen någon sorts växt. Titta för att se om det är något som rör sig. Beskriv i utrymmet nedan vad du observerar i mikroskopet och rita en enkel bild.

Del 6: Stereoskopiskt dissektionsmikroskop

Din instruktör kommer att demonstrera korrekt användning av dissektionsmikroskopet. Dessa mikroskop ger i allmänhet en lägre förstoring än det sammansatta mikroskop du använder.

Förfarande

Se på de exemplar som finns på labbbordet med hjälp av det dissekerande mikroskopet. Lägg märke till att mikroskopet har två ljuskällor, en från basen och en från ovan. Exemplaren är inte alltid monterade på ett objektglas. Observera också att när du betraktar föremålen under dissektionsmikroskopet är de tredimensionella.

Rengöring och skötsel av mikroskopet

1. Beskriv hur och med vad du ska rengöra mikroskopets lins.
2. Nämn fyra saker som du ska göra när du är klar med mikroskopet i slutet av laborationen.