Isolering av Malassezia furfur från en katt

Släktet Malasseziaconsisterar av lipofila jästsvampar som är kända för att ingå i mikrofloran i människans hud och många däggdjur och fåglar och som sällan isoleras från miljön (11). Dessa jästsvampar har den typiska fysiologiska egenskapen att de använder lipider som kolkälla. Med undantag för Malassezia pachydermatis kräver de återstående arterna av släktet Malassezia tillskott av långkedjiga (C12 till C24) fettsyror för in vitro-tillväxt. Taxonomin för dessa jästsvampar har alltid varit kontroversiell (8). För några år sedan var de accepterade arterna M. furfur (Robin) Baillon 1889 och M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Nyligen har släktet reviderats på grundval av molekylära data och lipidkrav och har utvidgats till att omfatta sju arter: M. furfur,M. pachydermatis, M. sympodialis,M. globosa, M. obtusa, M. restricta och M. slooffiae (4).

M. furfur är en känd opportunistisk kutan patogen hos människor. Den är orsaken till pityriasis versicolor, pityriasis capitis, seborrheisk dermatit och follikulit. Malassezia-arter får dock allt större betydelse som en framväxande patogen, eftersom de har beskrivits orsaka systemiska infektioner hos patienter med nedsatt immunförsvar och hos nyfödda barn som får intravenösa lipider (1, 12). Syftet med denna undersökning var att studera den lipofila mikrobiotan i de yttre hörselgångarna hos katter utan otitis externa. I denna artikel beskrivs den första isoleringen av M. furfur från en katt.

De yttre hörselgångarna hos 33 husdjurskatter (17 hanar och 16 honor) utan otitis externa provtogs med hjälp av en svabb. Proverna odlades på Sabouraud glukosagar (SGA; Biolife s.r.l., Milano, Italien), SGA kompletterad med olivolja (10 ml/liter) och Leemings medium (10 g pepton, 5 g glukos, 0,1 g jästextrakt, 4 g torkad oxgalla, 1 ml glycerol, 0,5 g glycerolmonostearat, 0,5 ml Tween 60, 10 ml helmjölk från ko, 12 g agar per liter, pH 6,2) (9). Alla medier innehöll 0,05 % kloramfenikol och 0,05 % cykloheximid. Varje cerumenutstryk fixerades med värme, färgades med Diff-Quick och undersöktes mikroskopiskt för att se om det fanns typiska Malassezia-celler. Plattorna inkuberades vid 35 °C och undersöktes efter 3, 5, 7 och 14 dagar. När tillväxt upptäcktes valdes fem olika kolonier ut från SGA kompletterat med olivolja och från Leemings medium och subkulturerades på SGA för att bestämma deras lipidberoende. M. pachydermatis identifierades genom mikroskopisk morfologi och genom förmågan att växa på SGA. Identifieringen av de lipidberoende jästsvamparna baserades på Tween-diffusionstestet som föreslagits av Guillot et al. (7), Cremophor EL-assimilationstestet och spaltning av eskulin som beskrivs av Mayser et al. (10), och följande typstammar användes som kontroller: M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (där NT står för neotyp), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T och M. obtusa CBS 7876T (vänligen tillhandahållna av E. Guého och J. Guillot). Tween-diffusionstestet gör det möjligt att skilja mellan lipidberoende arter beroende på deras förmåga att assimilera olika polyoxyetylensorbitanestrar (Tweens 20, 40, 60 och 80). Cremophor EL innehåller ricinolja och ricinolsyra och används som ytterligare en nyckelkaraktär för differentiering av arterna M. furfur, M. slooffiae och M. sympodialis.

Typiska Malassezia-celler var uppenbara i Diff-Quick-färgade utstryk av cerumen från sju katter, men endast fem av dessa prover var positiva vid odling. Malassezia-arter isolerades från sju katter (21,2 %), men i två Diff-Quick-färgade utstryk från dessa katter påvisades inte de typiska Malassezia-cellerna. Jäst som tillhör andra arter isolerades inte. Hos sex katter (18,1 %) isolerades endast M. pachydermatis under den första inkubationsveckan (tre isolat odlades efter tre dagar, två efter fem dagar och ett efter sju dagar). Endast en lipidberoende art isolerades från en katt vid 7 dagars inkubation. Detta isolat bildade gräddiga, släta och umbonade kolonier med en genomsnittlig diameter på 4,3 mm på modifierad Dixon-agar (36 g maltextrakt, 6 g pepton, 20 g torkad oxgalla, 10 ml Tween 40, 2 ml glycerol, 2 ml oljesyra, 12 g agar per liter, pH 6,0) (4) efter 7 dagars inkubation vid 32 °C. Konsistensen var spröd och cellerna var ovala till sfäriska (1,5-3,0 μm gånger 1,5-4 μm). Knoppar bildades på en bred bas, och korta trådar sågs i vissa celler. Katalasreaktionen var positiv. Detta isolat använde de fyra Tweens (20, 40, 60 och 80), assimilerade Cremophor EL och var svagt positivt för eskulinklyvning, liksom typstammarna M. furfur CBS 1878T och M. furfur CBS 7019NT (fig. 1). Enligt dessa resultat identifierades denna lipidberoende jäst som M. furfur(7, 10).