Introdução
Blocos de Tecido Embutidos em Parafina geralmente se referem a espécimes de tecido de parafina fixada em formalina (FFPE) que têm sido usados em várias aplicações terapêuticas e pesquisas por muitas décadas. É um método usado para preservar e preparar biospecimens a serem usados em pesquisa experimental, exame, diagnóstico e desenvolvimento terapêutico. A amostra de tecido é primeiramente preservada através da fixação usando formalina ou formaldeído para garantir que as estruturas vitais e proteínas dentro do tecido permaneçam o mais próximo possível da condição quando ele ainda faz parte do hospedeiro. Após a fixação, ela é embutida em um bloco de parafina para facilitar a secção e montagem em lâminas microscópicas para fins de exame.
Processo
Os tecidos são primeiramente coletados tanto de hospedeiros doentes quanto de hospedeiros normais. Em biopespecimens cancerosos, o oncologista frequentemente compara o tumor primário com amostras que são obtidas de locais metastáticos distantes. Os tecidos obtidos geralmente medem apenas alguns centímetros, dependendo da natureza e da fonte e do tecido. Imediatamente após a excisão, o biospecimen é imerso em formalina neutra tamponada a 10% durante 18 a 24 horas para endurecer o tecido. Em seguida, é desidratado e limpo com o uso de concentrados crescentes de etanol. Em seguida, é incorporado em parafina de grau imunohistoquímico que é especificamente usada para a incorporação de tecidos fixados em formalina. Um dos factores mais cruciais é o tempo de fixação, uma vez que os tecidos que são fixados demasiado cedo podem ser inutilizáveis para estudos de biologia molecular. A duração da fixação é suficientemente longa para garantir a preservação.
Após a aquisição, as amostras são manipuladas cuidadosamente para manter a qualidade. A falha no manuseio adequado pode levar a uma exposição de características incomuns que podem afetar os resultados da pesquisa ou deduções. O método de preparação geralmente depende dos requisitos da equipe de pesquisa. Pode variar desde especificações relativas à finalidade do tecido, tamanho ou corte do tecido. Um bom exemplo seria o corte do músculo ao longo do “grão” da fibra muscular ou através deles. Ao longo da preparação da amostra, um médico patologista certificado será envolvido para assegurar que o procedimento seja completado com precisão e também para avaliação da qualidade.
Após as amostras serem completadas, elas são armazenadas em bancos de tecidos. Registros úteis, como informações demográficas e quando o tecido foi coletado ou preservado também devem ser mantidos, pois podem ser úteis para a equipe de pesquisa. Outras informações críticas que devem ser armazenadas incluem formulários de consentimento assinados e documentos legais afiliados ao biospecimen, pois podem impactar a usabilidade do biospecimen em pesquisas e ensaios clínicos.
Aplicações
Os blocos de tecido incluídos em parafina têm muitas aplicações na pesquisa. Estes blocos de tecido são frequentemente utilizados em imunohistoquímica onde as secções de tecido são montadas numa lâmina. Estas secções são então banhadas usando uma solução que contém anticorpos que se ligam a proteínas e estruturas. A coloração também pode ser realizada para ajudar na visualização dos anticorpos, que mostra a localização das estruturas que estão presentes na amostra. Esta informação pode ser crítica para ajudar no diagnóstico de doenças como a doença de Alzheimer ou o cancro. As informações obtidas através da imuno-histoquímica também são vitais para muitos projetos de câncer que estão sendo realizados nos laboratórios atualmente. Algumas das áreas terapêuticas onde as amostras de tecido são normalmente utilizadas são:
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Imunologia – as respostas do sistema imunológico são analisadas tanto no estado doente como saudável. O estudo de amostras de tecido de um paciente com a doença auto-imune ajuda a determinar a causa e o desenvolvimento da terapia para as pessoas afectadas.
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Hematologia – os bloqueios de tecido incluídos em parafina são vitais no estudo de vários tipos de sangue e doenças relacionadas. A hematologia é um campo crucial que tem ajudado na descoberta de muitas curas para doenças relacionadas com o sangue e seus componentes. Alguns estudos relacionados a este campo incluem estudos da medula óssea, que podem incluir genética, toxicologia e regeneração tecidual.
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Oncologia – os bloqueios teciduais incrustados em parafina são importantes na oncologia, pois os tecidos tumorais preservados têm morfologias características que não estão presentes em outros tecidos. As equipas de investigação utilizam frequentemente estas amostras para procurar proteínas que possam ajudar no diagnóstico e avaliação da doença. Os tecidos tumorais fixados em parafina (FFPE) geralmente devem ter 60% de conteúdo tumoral.
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Comparativo – também há blocos de tecido fixados em parafina que são tecidos saudáveis coletados de doadores saudáveis. Esses tecidos são utilizados para fins comparativos e também são importantes para pesquisa e desenvolvimento.
Desvantagem
Em blocos de tecido incrustados em parafina, o processo de fixação geralmente requer o uso de formalina ou formaldeído que desnaturaliza as proteínas que estão na amostra de tecido. Isto pode fazer com que as proteínas sejam invisíveis aos anticorpos que são especificamente desenvolvidos para detectá-los. Para compensar, foram desenvolvidas técnicas de recuperação de antígenos para recuperar especificamente proteínas, DNA e RNA a partir destes blocos de tecido. Isto ajuda a abrir um vasto arquivo de material preservado e anotado para estudos de bioquímica e biologia molecular.
Conclusão
A qualidade dos bloqueios teciduais em parafina é crucial para o trabalho usando estas amostras como fonte de proteínas, DNA e RNA. Isto é devido ao fato de que mesmo o tecido mais bem preservado conterá proteínas inativas parcialmente degradadas, DNA e RNA.