Isolamento da Malassezia furfur de um gato

O gênero Malasseziaconsists de leveduras lipofílicas que são conhecidas como componentes da microflora da pele humana e muitos mamíferos e aves e raramente são isoladas do meio ambiente (11). Estas leveduras têm a propriedade fisiológica típica do uso de lipídios como fonte de carbono. Com excepção da Malassezia pachydermatis, as restantes espécies do género Malassezia necessitam de suplementos de ácidos gordos de cadeia longa (C12 a C24) para o crescimento in vitro. A taxonomia destas leveduras tem sido sempre motivo de controvérsia (8). Há alguns anos, as espécies aceitas foram M. furfur (Robin) Baillon 1889 e M. pachydermatis (Weidman) Dodge 1935. Recentemente, o gênero foi revisado com base em dados moleculares e requisitos lipídicos e foi ampliado para incluir sete espécies: M. furfur,M. pachydermatis,M. sympodialis,M. globosa,M. obtusa,M. restricta,e M. slooffiae (4).

M. furfur é um patógeno cutâneo oportunista conhecido de humanos. É o agente causal da pitiríase versicolor, pitiríase capite, dermatite seborréica, e foliculite. No entanto, a importância das espécies de Malassezia está aumentando como patógeno emergente, pois têm sido descritas para causar infecções sistêmicas em pacientes imunocomprometidos e em recém-nascidos que estão recebendo lipídios intravenosos (1, 12). O objetivo desta pesquisa foi estudar a microbiota lipofílica dos canais auditivos externos de gatos sem otites externas. Neste trabalho, o primeiro isolamento de M. furfur de um gato é descrito.

Os canais auditivos externos de 33 gatos domésticos (17 machos e 16 fêmeas) sem otites externas foram amostrados através de um swab. As amostras foram cultivadas em ágar glicose Sabouraud (SGA; Biolife s.r.l., Milão, Itália), SGA suplementado com azeite (10 ml/litro), e meio de Leeming (10 g de peptona, 5 g de glicose, 0,1 g de extrato de levedura, 4 g de bílis de boi dessecada, 1 ml de glicerol, 0,5 g de monoestearato de glicerol, 0,5 ml de Tween 60, 10 ml de leite de vaca gordo, 12 g de ágar por litro, pH 6,2) (9). Todos os meios continham 0,05% de cloranfenicol e 0,05% de ciclo-heximida. Cada esfregaço de cerúmen foi fixado ao calor, corado com Diff-Quick, e examinado microscopicamente para a presença de células típicas da Malassezia. As placas foram incubadas a 35°C e examinadas após 3, 5, 7, e 14 dias. Quando o crescimento foi detectado, cinco colônias diferentes foram selecionadas da SGA suplementada com azeite de oliva e do meio do Leeming e subcultivadas com SGA para determinar sua dependência lipídica. M. pachydermatiswas foi identificado pela morfologia microscópica e pela capacidade de crescimento em SGA. A identificação das leveduras dependentes de lipídios foi baseada no teste de difusão de Tween proposto por Guillot et al. (7), no teste de assimilação de Cremophor EL e na divisão da esculina descrita por Mayser et al. (10), e as seguintes cepas do tipo a seguir foram utilizadas como controle: M. furfur CBS 1878T,M. furfur CBS 7019NT (onde NT significa neótipo), M. sympodialis CBS 7222T,M. slooffiae CBS 7956T, M. globosa CBS 7966T, e M. obtusa CBS 7876T (gentilmente cedido por E. Guého e J. Guillot). O teste de difusão Tween permite diferenciar as espécies dependentes de lipídios de acordo com suas habilidades para assimilar vários ésteres de polioxietileno sorbitano (Tweens 20, 40, 60, e 80). Cremophor EL contém óleo de mamona e ácido ricinoleico e é usado como um personagem chave adicional para diferenciação das espécies M. furfur, M. slooffiae, e M. sympodialis.

Células típicas de Malassezia foram evidentes em esfregaços de cerúmen de sete gatos, mas apenas cinco dessas amostras foram positivas por cultura. As espécies de Malassezia foram isoladas de sete gatos (21,2%), mas em dois esfregaços de cerúmen Diff-Quick desses gatos, as células típicas de Malassezia não foram detectadas. As leveduras pertencentes a outras espécies não foram isoladas. Em seis gatos (18,1%), apenas M. pachydermatis foi isolado durante a primeira semana de incubação (três isolados foram cultivados aos 3 dias, dois aos 5 dias, e um aos 7 dias). Apenas uma espécie dependente de lipídios foi isolada de um gato aos 7 dias de incubação. Esse isolado formou colônias de creme, liso e umbonato com 4,3 mm de diâmetro médio em ágar Dixon modificado (36 g de extrato de malte, 6 g de peptona, 20 g de bílis de boi dessecado, 10 ml de Tween 40, 2 ml de glicerol, 2 ml de ácido oléico, 12 g de ágar por litro, pH 6,0) (4) após 7 dias de incubação a 32°C. A textura era friável, e as células eram ovóides a esféricas (1,5 a 3,0 μm por 1,5 a 4 μm). Os gomos foram formados em uma base ampla, e filamentos curtos foram vistos em algumas células. A reação catalítica foi positiva. Este isolado utilizou os quatro Tweens (20, 40, 60, e 80), assimilou Cremophor EL, e foi fracamente positivo para a divisão da esculina, assim como as cepas tipo M. furfur CBS 1878T e M. furfur CBS 7019NT (Fig.1). De acordo com estes achados, esta levedura dependente de lipídios foi identificada como M. furfur(7, 10).